Essai de deux tests immunologiques (intradermoréaction et réaction de fixation du complément) pour le dépistage des filarioses dans des populations de Haute-Volta où coexistent Wuchereria bancrofti, Onchocerca volvulus et Dipetalonema perstans

Bull. Org. mond. Sante 1969, 40, 831-842Bull. Wid Hith Org. Essai de deux tests immunologiques (intradermoreaction et reaction de fixation du complement) pour le depistage des filarioses dans des populations de Haute-Volta o'u coexistent Wuchereria bancrofti, Onchocerca volvulus et Dipetalonema perstans * R. GIDEL,1 J. BRENGUES2 & F. RODHAIN3 Par suite des defaillances frequentes des methodes parasitologiques et cliniques usuelles servant au depistage desfilarioses, en particulier dans le cas de sujetspeu infectes, les recher- ches se sont orientees vers la mise au point de methodes immunologiques. Les auteurs ont entrepris l'essai de deux antigenes purifies, utilise's l'un en intradermo- reaction, I'autre en reaction de fixation du complement, en vue de deceler les infections a Wuchereria bancrofti, Onchocerca volvulus et Dipetalonema perstans. Dans l'ensemble, l'intradermoreaction, qui a en outre l'avantage d'une realisation facile et d'une lecture immediate, a donne des resultats nettement meilleurs. Les deux tests immunologiques sont toutefois restes ne'gatifs chez un nombre appre'ciable de sujets filariens confirmes et ne peu- vent e'tre utilise's seuls pour le depistage. En revanche, des reactions positives ont ete cons- tatees chez un pourcentage important de sujets parasitologiquement et cliniquement negatifs. L'indication majeure des tests immunologiques semble etre la detection des sujets chez lesquels l'infection n'a pu etre reconnue par les methodes usuelles. INTRODUCTION BUT DE L'ETUDE Le prdsent travail a dtd effectud a la demande de l'Organisation mondiale de la Sante, suivant les recommandations du Comit6 OMS d'experts de * Travail de l'Organisation de Coordination et de Cooperation pour la Lutte contre les Grandes Endemies (OCCGE), Centre Muraz, Bobo-Dioulasso, Haute-Volta, et de la Mission de l'Office de la Recherche Scientifique et Technique Outre-Mer (ORSTOM) aupres de 1'OCCGE. Avec la collaboration technique de M. B. Bouchite, technicien (ORSTOM), et de MM. B. Athawet, A. Cisse et M. Simpore, infirmiers (Centre Muraz). 1 Docteur veterinaire, Section Zoonoses, Centre Muraz, Bobo-Dioulasso. 2 Entomologiste medical, Mission ORSTOM aupres de l'OCCGE, Bobo-Dioulasso. 'Assistant de parasitologie, Facult6 de Medecine, Uni- versite de Paris, France. l'Onchocercose (1966), du Comite OMS d'experts de la Filariose - infections A Wuchereria et a Brugia (1962, 1967) et du Comite OMS d'experts de l'Immu- nologie des Maladies parasitaires (1965). Une revue detaillee des methodes immunologiques utilisees pour le diagnostic des filarioses a 6te publi6e par Kagan (1963). I1 en ressort notamment que les r6sultats obtenus par les differentes auteurs sont difficilement comparables du fait du manque de standardisation tant dans les antigenes employes que dans les methodes utilisees. Le but de notre etude etait de tester deux anti- genes filariens purifies dans des zones oiu coexistent plusieurs filarioses. L'un etait I'antigene FST (de- nomme aussi FSC-D1) employe en intradermoreac- tion et I'autre etait I'antigene FP 111 employe en 2339 - 831- 3 R. GIDEL, J. BRENGUES & F. RODHAIN fixation du complement. Tous deux ont ete prepar6s par le Professeur Sawada (Ecole de Medecine, Uni- versite de Gunma, Maebashi, Japon). Afin de faciliter la comparaison de nos r6sultats avec ceux d'autres auteurs utilisant les memes anti- genes, nous avons suivi les methodes preconisees par I'OMS pour l'intradermoreaction et par le Professeur Sawada pour la fixation du complement. PRfSENTATION DES VILLAGES PROSPECTiS Geographie, climat et vegetation Les trois villages qui ont 6te choisis pour la reali- sation de cette enquete sont situ6s dans la region de Bobo-Dioulasso (Haute-Volta), entre 100 et 120 de latitude N et 40 et 50 de longitude W (voir figure). Le climat est du type soudano-guin6en (Aubre- ville, 1950). La pluviometrie annuelle moyenne est de 1100 i 1200 mm. Du point de vue de la vegetation, c'est une region de savane boisee a hautes herbes qui s'est constitute par d6gradation de la foret dense originelle qui survit I l'etat de forets reliques. Les cours d'eau permanents sont bord6s de galeries forestieres. Situation Le premier des villages prospectds, Samandeni(40 28' de longitude W et 110 28' de latitude N), est situe i 45 km au nord-ouest de Bobo-Dioulasso, en bordure de la Volta Noire. L'onchocercose y est predominante. Le second est Tingr6la (40 49' de longitudeWet 10° 39' de latitude N) situe pres de Banfora au bord d'un lac, dans une region marecageuse, a 90 km au sud de Bobo-Dioulasso. C'est une zone 'a filariose de Ban- croft. Le troisieme village est Banankeledaga (4c 19' de longitude W et 110 19' de latitude N) situe 'a une quinzaine de kilometres au nord-ouest de Bobo- Dioulasso. I1 a ete choisi comme village temoin. I1 n'est pas indemne de filariose- un tel village semble difficile 'a trouver - mais on y rencontre neanmoins un certain pourcentage de sujets chez qui on ne peut mettre en evidence Onchocerca volvulus, Wuchereria bancrofti et Dipetalonema perstans par les methodes usuelles. SITUATION GEOGRAPHIQUE DES VILLAGES PROSPECTES 832 ESSAI DE DEUX TESTS IMMUNOLOGIQUES POUR LE DfPISTAGE DES FILARIOSES 833 MATIERIEL ET METHODES ORGANISATION DES ENQUETES SUR LE TERRAIN L'enquete a porte sur 369 sujets au total. Le travail sur le terrain a ete effectue de nuit entre 22 heures et 2 heures du matin au cours de la deuxieme quinzaine de juin et de la premiere quinzaine de juillet 1967. Chaque sujet a e soumis a un certain nombre d'exa- mens: intradermoreaction, prelevements de sang capillaire et de sang veineux avec et sans anticoagu- lant, examen clinique et biopsie cutanee, enfin lecture de l'intradermoreaction. MtTHODES PARASITOLOGIQUES Recherche de microfilaires dans le sang Goutte cpaisse calibrge. Vingt mm3 de sang capil- laire etaient preleves au medius 'a l'aide d'une pipette calibree et deposes sur une lame. La goutte etait aus- sitot defibrinee et un peu etalee. Le lendemain, au laboratoire, les gouttes etaient deshemoglobinisees en plongeant les lames quelques minutes (5 'a 7) dans un bac contenant de l'eau distillee. Apres sechage des lames, les gouttes etaient fixees 10 minutes 'a l'alcool methylique, puis colorees au Giemsa, 'a raison de 3 gouttes de Giemsa rapide pour 2 millilitres d'eau distillee neutre. Recherche apres concentration. Celle-ci a ete effec- tuee selon la technique preconisee par Sang & Petit- hory (1963) dont le principe est d'assurer la concen- tration des microfilaires, dans le sang citrate, par centrifugation en presence de saponine. Recherche de microfilaires dans le derme Les biopsies dermiques ont ete effectuees 'a l'aide d'un instrument special,' rendant cette operation instantanee et indolore et permettant d'obtenir des prelevements de meme surface et de meme volume. Chaque sujet a e l'objet d'une double biopsie pra- tiquee dans la region trochanterienne. Chaque prele- vement etait depose aussitot dans une goutte de liquide physiologique sur une lame porte-objet. Trois lectures successives etaient faites au microscope, 'a l'objectif 40 x, immediatement apres la biopsie puis 10 et 20 minutes plus tard. 1 Instrument d6nomm6 Sckerastanze, fabrique par Lean- hard Klein, Chirurgische ophtalmologische Instrumente, Heidelberg, R6publique f6d6rale d'Allemagne. MfTHODES CLINIQUES Chaque malade a ete l'objet d'un examen clinique rapide afin de depister essentiellement, d'une part les aveugles et les porteurs de kystes, et d'autre part les elephantiasiques. METHODES IMMUNOLOGIQUES Intradermore'action L'intradermoreaction a 6te effectuee avec I'anti- gene filarien FST (Sawada et al., 1965). Cet antigene hautement purifie, prepare a partir de Dirofilaria immitis, est essentiellement de nature proteinique, avec une faible partie glucidique (2,5 %). I1 est lyophilisd et est reconstitue au moment de l'emploi par addition de liquide physiologique de fa9on a ce que 1 ml de la solution contienne 2,5 ,g de proteine purifiee. Chaque sujet a requ 0,02 ml de cet antigene (correspondant 'a 0,05 ,ug de proteine) dans le derme de la face anterieure de l'avant-bras gauche. Une injection temoin de meme volume dtait faite dans le derme de l'autre avant-bras avec du liquide physiologique. L'injection intradermique d'un volume de 0,02 ml determine habituellement une papule de 0,2 cm2 de surface (5 mm de diametre). La lecture est effectu6e 15 minutes apres l'injection et la surface de la papule est mesuree avec un stencil transparent & surfaces delimitees de 0,2 'a 14 cm2. Lorsque la reaction est negative, il n'y a pas d'augmentation de surface de la papule et il y a meme en g6n6rat diminution, voire disparition complete de celle-ci. La reaction est consideree comme positive si la surface de la papule a double, c'est-'a-dire si elle atteint 0,4 cm2, soit 7 mm de diametre (Desowitz et al., 1966). Fixation du compliment Cette reaction a ete effectuee selon la technique qui nous a et indiquee par Sawada et qui est du type Kolmer rapide. L'antigene utilise a ete l'antigene FP 111 pr6pare par Sawada i partir de Dirofilaria immitis et lyophylise. I1 est reconstitue au moment de l'emploi avec le liquide physiologique Mg++ (NaCL: 8,5 g; SO4Mg, 7 H20: 0,1 g; eau distillee: 1000 ml), de faqon 'a ce que 1 ml de la solutioi R. GIDEL, J. BRENGUES & F. RODHAIN contienne 100 ,g de proteine purifiee. La reaction se fait apres titrage du complement en presence de 0,2 ml de l'antigene en solution. On utilise pour la reaction 0,2 ml de serum decomplemente et dilue au 1/5 avec le liquide physiologique Mg ++ auquel on ajoute 2 unites de complement sous un volume de 0,2 ml i la dilution indiqu6e par le titrage et 0,2 ml d'antigene. Apres agitation et incubation de 3 heures it +4°C au refrigerateur, les tubes sont places 15 minutes au bain-marie a 37°C. On ajoute alors 0,2 ml de globules rouges de mouton sensibili- ses. La lecture est effectuee apres 30 minutes de bain-marie a 37°C et les resultats sont notes de ± a + + + selon le degre d'hemolyse. RESULTATS RESULTATS DES EXAMENS PARASITOLOGIQUES ET CLINIQUES Ces resultats figurent dans le tableau 1 qui indique dgalement la repartition des sujets positifs selon la ou les filaires en cause. I1 apparait, i la lecture de ce tableau, que dans les deux localites oiu pr6dominent d'une part l'oncho- cercose (Samandeni), d'autre part la filariose de Bancroft (Tingrela), une forte proportion de sujets sont aussi porteurs de D. perstans. D'autre part, dans le village de Banankeledaga choisi comme temoin, on observe neanmoins 35,7 % de sujets positifs dont la majorite (29,9%) sont porteurs de D. perstans. RESULTATS IMMUNOLOGIQUES OBTENUS CHEZ LES SUJETS POSITIFS (TABLEAU 2) Pour all6ger la suite de cet expose, nous appelle- rons sujets positifs les sujets depistes par les examens parasitologiques ou cliniques. Sujets porteurs d'une seule espece de filaire Les sujets porteurs d'une seule espece de filaire sont, en g6neral, peu nombreux. Cela est dit au fait que l'on observe fr6quemment les associations sui- vantes: 0. volvulus et D. perstans; W. bancrofti et D. perstans; W. bancrofti, 0. volvulus et D. perstans (tableau 1). 0. volvulus. Vingt sujets seulement sont porteurs d'O. volvulus seule. Quinze d'entre eux ont pr6sente une intradermoreaction positive et 12 une fixation du complement positive; 2 se sont montres negatifs vis-a-vis des deux tests. W. bancrofti. Vingt-neuf sujets sont porteurs de W. bancrofti seule. Parmi ceux-ci, 75,9% ont pre- sente une intradermoreaction positive et seulement 10,4% une fixation du complement positive; 17,2% de ces sujets ont ete ndgatifs aux deux tests. D. perstans. Parmi les 52 sujets porteurs de D. perstans seule, 84,6% ont presente une intra- dermoreaction positive et 26,9 % seulement une fixation du compl6ment positive; 13,5% des sujets dtaient ndgatifs aux deux tests. Sujets porteurs de plusieurs especes de filaires 0. volvulus- W. bancrofti. Le tres faible effectif de cette categorie (4 personnes) ne permet pas de tirer des conclusions. W. bancrofti - D. perstans. Sur les 51 sujets por- teurs de ces deux especes de filaires, 74,5% etaient positifs a l'intradermoreaction et 17,7% seulement A la fixation du complement; 19,6% etaient negatifs aux deux reactions. 0. volvulus - D. perstans. Sur les 69 sujets de ce groupe, 55,0% ont ete positifs a l'intradermor6action et 56,5% i la fixation du complement; 18,8% etaient n6gatifs aux deux reactions. 0. volvulus - W. bancrofti - D. perstans. Parmi les 42 sujets presentant cette association, 73,7% ont donne une intradermoreaction positive et 33,3 % une fixation du complement positive, 11,9% etant nega- tifs aux deux tests. Sujets porteurs d'une espetce defilaire seule ou associee ,a d'autres especes 0. volvulus. Parmi les 135 sujets porteurs d'O. vol- vulus seule ou associee a D. perstans et (ou) a W. ban- crofti, 63,7% ont ete positifs 'a l'intradermoreaction et 48,9% a la fixation du complement, 16,3% etant negatifs aux deux r6actions. W. bancrofti. Cent vingt-six sujets etaient porteurs de W. bancrofti seule ou associee a 0. volvulus et (ou) A D. perstans: 75,4% d'entre eux ont pr&sentW une intradermoreaction positive et 22,2% une fixation du complement positive, 15,9% etant negatifs aux deux tests. 834 ESSAI DE DEUX TESTS IMMUNOLOGIQUES POUR LE DiPISTAGE DES FILARIOSES \ Ct O e D. perstans. Sur les 214 sujets porteurs de D. pers- . _____________ tans seule ou associee a 0. volvulus et (ou) a W. ban- ILT GO Q Q crofti, 70,0% ont ete positifs a l'intradermor6action I- @ o * 8E ; et 35,5% a la fixation du complement, 16,4% etant 0o0 z negatifs aux deux tests. 0 X a o ea Xu F 0 . O _ LO -@4_ RESULTATS IMMUNOLOGIQUES OBTENUS CHEZ LES0 U) SUJETS NGATIFS (TABLEAU 2) Co 0 ~~00 0 Z a Au total, 102 sujets ont ete n6gatifs aux examens z o o a eo g >X cliniques et parasitologiques. Cependant, 54,9% - F < d'entre eux ont e't positifs vis-it-vis de l'intradermo- .0 LO V- W reaction et 38,2% vis-'a-vis de la fixation du comple-E ment. Seulement 31,4% ont ete negatifs aux deux U *.sQ as tests. > o6id COMPARAISON DES RESULTATS IMMUNOLOGIQUES U.uLL ci co CO OBTENUS CHEZ LES SUJETS POSITIFS ET CHEZ LES SUJETS 0 V W WQ NtGATIFS (TABLEAU 3) Intradermore'action 0 _____ En comparant les resultats portes dans le tableau 3,Co Co 0 ,< I _ X on constate que les reactions positives sont signifi- - 0o cativement plus frequentes chez les sujets positifs que 2 chez les sujets negatifs (X2 = 8,792 pour 1 degre de0~~~~~~~~~~X -Co Q~ X 01 N C4liberte, 0,01 > P > 0,001). Cette difference est due, z, oE en fait, a une moindre frequence des r6actions posi- 0z I I a, tives chez les sujets negatifs des deux premiers groupes 6c d'age (voir ci-dessous). U z b: Co N \ C Fixation du compliment0 .- W k_ _ o Contrairement 'a ce que nous avons observe avec 0__ t Q l'intradermoreaction, nous avons note autant de z a r g r6actions positives chez les sujets negatifs et chez les III = a 4) c sujets positifs (X2 = 0,536 pour 1 degre de liberte, C E- W .. P > 0,30), quel que soit le groupe d"age considere o~~~~ 8 ~~~z (voir ci-dessous.) o 0 0 gd R .- _ _ RISULTATS IMMUNOLOGIQUES EN FONCTION DE L'AGE 4 2 @8 0 ' 0 Du fait d'une certaine reticence de la population, co 0 nous n'avons pu tester qu'un petit nombre d'enfants E <'' > _ _ o a en bas age et nous avons ete amenes i adopter les Co c groupes d'age suivants, afin d'avoir dans chacun w Z 0 x ° d'eux des effectifs suffisants qui permettent de a calculer des pourcentages statistiquement valables: X0 | < | s~ > groupe 1: sujets de 0 i 13 ans, o ,. '° groupe 2: sujets de 14 a 21 ans,Z~~~~~~~~ tC E groupe 3: sujets de 22 i 44 ans, m C ' groupe 4: sujet de 45 ans et plus. 835 R. GIDEL, J. BRENGUES & F. RODHAIN 0 .0 E 0 z 00 e 04Q 8 c O - 0 1- 1- Un (0 U, 0 r- a lt 0 CC Wr q Ci Ct q cq0 01 (0 UC;aIr co 0oc 1 LOi co+ IV,, 04 °- Ln CO lqt C-3 co C. 0 .0 04 C#O v- 0D 01 '- 0 co (0 0E T oM ojc ,w 04 r- co z 0) .0 E 0 z 0.0E 0 z r-~ r- 0 Cl. in r C404 o in I- 01 r C 00Co 0 04 CO 0 cg r- C6(0 to co oL 't ot C ; Q O c _ Co _ 04 Dt - 0004 in in 01 in C6 01 co t- In 0in U, o in 0Q LO U)04 o6 te 1 LO co_ 0 o meD+ C-l - cm- v- I%-, L~~~~~~~~~~0 __ 2CE 0 -_40C 0 I- 0 0 z X 0 .0 0 z 0 .0 0 z O t (0 r- (0 C' 00 N a " D leCO r in to0 inLO co (0 _ C C4C4 CO Co CO 01 (0 co CO0 co O cm ur (0 00 01 Co 0 't t ° t-7 C6 I M 00 _ 40 uo q:l - _ _r C t r, %- r N _in_C'- 0 C i C04c4 0C0 in 04CO CO 0 .00 0(a 0 01 d1 , 01 oj il co C04E-o0 C'4 04 in LO CO lw to oM WI 0 UL C4 v z c) 0i) IV Q i i ci i~ 6 ki 6 6 k 6 6 _; -; , Q i ° s < O ~ X0 0D < .k C 0 ._ 0 0QI0) 0 .0 4 ui 04co 0 00 .0' to co u- 0 .0 0 oI 0) L- L Ec c 0 0.. - .0 0 Li 11 + L. 0 + 0] +0] C.) 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Resultats immunologiques en fonction de l'age chez les sujets positifs Ces resultats sont indiques dans le tableau 4. Intradermoreaction. Les pourcentages de sujets immunologiquement positifs varient de 61,5% (groupe 4) 'a 82,0% (groupe 2). L'analyse statistique montre qu'il n'y a pas de difference significative lorsqu'on compare les quatre groupes d'age entre eux (X2 = 7,422 pour 3 degres de liberte, P > 0,05). Par contre, si on compare les trois premiers groupes d'age (pourcentage moyen de sujets avec intra- dermoreaction positive: 76,7 %) au quatrieme (61,5% de sujets avec intradermoreaction positive), on constate que ces pourcentages sont significative- ment differents (X2 = 6,624 pour 1 degre de liberte, 0,02 > P > 0,01). Fixation du compliment. Les pourcentages de sujets immunologiquement positifs varient de 30,7% (groupe 4) a 43,6% (groupe 2). En comparant les quatre groupes d'age entre eux, on n'observe pas de difference significative entre ces pourcentages (x2= 2,707 pour 3 degres de liberte, P > 0,30). De meme, en etudiant comparativement les deux premiers groupes d'age, oiu les pourcentages sont les plus eleves, et les groupes 3 et 4 oiu les pourcentages sont les plus faibles, on ne constate pas de difference significative (X2 = 3,076 pour 1 degre de liberte, p > 0,05). Resultats immunologiques en fonction de l'dge chez les sujets negatifs Ces resultats sont indiques dans le tableau 4. Intradermoreaction. On observe une augmentation tres nette du pourcentage de reactions positives en fonction de I'age pour les trois premiers groupes et, par contre, une 1lgere diminution pour le groupe des sujets les plus ages. Les differences entre ces pour- centages sont tres significatives (X2 = 23,079 pour 3 degr6s de liberte, P < 0,001). Fixation du compliment. Les pourcentages de sujets negatifs, immunologiquement positifs, varient de 34,6% (groupe 3) a 42,9% (groupe 4). Ces pourcentages ne sont pas significativement differents (X2 = 0,365 pour 3 degres de liberte, P > 0,95). RESULTATS IMMUNOLOGIQUES EN FONCTlON DU SEXE (TABLEAU 5) En ce qui concerne l'intradermoreaction, on n'observe pas de difference significative entre les resultats obtenus dans les deux sexes, aussi bien chez les sujets positifs (X2 = 0,295 pour 1 degr6 de liberte, P > 0,50) que chez les sujets negatifs (X2 = 0,990 pour 1 degre de liberte, P > 0,30). I1 en est de meme pour la fixation du complement (chez les sujets positifs: x2 = 0,267 pour 1 degre de 837 R. GIDEL, J. BRENGUES & F. RODHAIN _- ,- u O *e 0 0~~~I 0) .0 E r-C4 W'0 z .~ .0,, .E 01 01o. Ito::'R9 co co le0 .0 I I 0~~~~ o V _ 0 _ CM _ 04 08 XXO 0~~ a$ w 0O 01 04 _4 C0 c CD co m co w lZcciJ °° X~~~~~~~c _ U. 0 co 10r a E ) -CO 0 z .0 to 0 0co E 01 0O P-0 z 0 01 04 0 XO VI0 Le) coc 0 0 0 01 0 0 0 0 Q 0 0 0 0 V. V" W. W co v * c 0Q0 la 00 a .CL V CL9a. 0 0 0 0 0 0 0 liberte, P > 0,50; chez les sujets negatifs: X2 = 0,166 pour 1 degre de liberte, P > 0,50). RESULTATS IMMUNOLOGIQUES EN FONCTION DE LA LOCAL1TE (TABLEAU 3) Cette etude ne concerne que les sujets positifs, 1'effectif des sujets negatifs etant insuffisant dans deux des trois localites (Samandeni, Tingrela). L'etude statistique des resultats obtenus avec l'intradermoreaction montre qu'il existe une diffe- rence significative entre les resultats observes dans les trois localites (X2 = 18,898 pour 2 degres de liberte, P < 0,001). De meme, pour la fixation du complement, les resultats different de fa9on significative d'une localite i l'autre (X2 = 64,372 pour 2 degres de liberte, P < 0,001). RESULTATS IMMUNOLOGIQUES EN FONCTION DE LEUR INTENSITE Ititradermore'action 0 E -I.; a 0 E le a E0 0 0 .O _ a C 4- 0 0 '0 11. U U. 0 'a 1.0 C II a3 0 Dans le tableau 6, nous avons indique la reparti- tion des sujets positifs et negatifs en fonction de la surface de la reaction cutanee. A la lecture de ce tableau, il semblerait que les reactions egales ou superieures 'a 1,0 cm2 soient plus frequentes chez les sujets positifs. Cependant, en comparant les moyennes, nous avons constate que leur difference n'etait pas significativement differente. Fixation du compliment Dans le tableau 7, nous avons indique la reparti- tion des sujets positifs et negatifs en fonction de l'intensit6 de la reaction serologique. L'etude statistique montre que les resultats obte- nus dans les quatre categories ne different pas significativement pour les sujets positifs et negatifs (X2=3,796 pour 3 degres de liberte, P >0,20). I1 semble toutefois que chez les sujets positifs, on observe un pourcentage plus eleve de reactions fortement positives (FC + + et FC + + +). Cepen- dant, pour une probabilite egale ou inferieure i 0,05, on ne constate pas de difference significative entre les pourcentages de reactions fortement positives chez les sujets positifs et negatifs (X2= 3,077 pour 1 degre de liberte, 0,10 >P> 0,05). 838 C 0O 0 .0 0 0 c 0 0. 0 CL + U- IL. 0 a + U. c] 0_C .0 E 0 z + U. 0 + a 0 .0 E 0 z ,_ __ ~~oO B- - UI.0z 0 '0 0 0 U) c0 0 0O. 00 U) 0< :J w a z 0 U z 0 z m uJ n U) 5J:) -J <0 -J 0 z U) -J U) T0 .0 E0 z 0 '0 0 00 839ESSAI DE DEUX TESTS IMMUNOLOGIQUES POUR LE DtPISTAGE DES FILARIOSES TABLEAU 5 RESULTATS IMMUNOLOGIQUES EN FONCTION DU SEXE Sujets positifs Sujets n6gatifs Pr6sentant une r6action a Pr6sentant une r6action a Sexe des sujets Total ID+ FC+ ID+ ou FC+ Total ID+ FC+ ID+ ou FC+ Nombre % Nombre % Nombre % Nombre % Nombre % Nombre Y Masculin 142 104 73,2 51 35,9 122 85,9 52 31 59,6 21 40,4 38 73,1 F6minin 125 87 69,6 41 32,8 102 81,6 50 25 50,0 18 36,0 32 64,0 Total 267 191 71,5 92 34,5 224 83,9 102 56 54,9 j 39 38,2 70 68,6 a ID = intradermor6action; FC = reaction de fixation de complement. TABLEAU 6 REPARTITION DES SUJETS PRESENTANT UNE INTRADERMOREACTION POSITIVE SUIVANT LA SURFACE DE LA PAPULE Nombre de sujets pr6sentant une r6action ID a positive Cat6gorie R6partition suivant la surface de la papule exprim6e en cm 2 Total 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 [1,3 1,4 1,5 1,6 1,7 1,8 1,9 2,0 Sujets positifs 191 15 23 18 36 16 29 15 13 18 - 1 2 - 1 1 2 1 Sujetsnegatifs 56 6 5 101 7 10 9 2 3 3 1 - - - - - Total [247 21 28 28 43 26 38[ 17 16 121 1 1 2 - 1 2 1 a ID = intradermor4action. TABLEAU 7 REPARTITION DES SUJETS PRESENTANT UNE REACTION DE FIXATION DU COMPLEMENT POSITIVE SUIVANT L'INTENSITE DE LA REACTION Sujets pr6sentant une r6action FC a positive R6partition suivant l'intensit6 de la reactionCat6gorie Total FC| FC + FC ++ FC +++ Nombre % Nombre % Nombre % Nombre % Sujets positifs 92 34 37,0 31 33,7 12 13,0 15 16,3 Sujets negatifs 39 20 51,3 13 33,3 2 5,1 4 10,3 Total 131 54 41,2 a FC - r6action de fixation du complement. 44 33,6 14 10,7 19 14,5 R. GIDEL, J. BRENGUES & F. RODHAIN DISCUSSION Du point de vue parasitologique, la technique utilisant la concentration a permis de depister 53 sujets qui etaient negatifs a la goutte epaisse (14,4% des 369 sujets examines) mais reciproque- ment 25 (6,8% des 369 sujets examines) etaient positifs 'a la goutte epaisse et negatifs a la concentra- tion. Les deux methodes doivent donc etre conside- rees comme complementaires. Si la technique de la concentration ne peut etre employee, il conviendrait d'avoir recours i la methode d'Edeson (1959), qui consiste 'a prelever 60 mm3 de sang capillaire. A la suite de nombreux auteurs, nous avons aussi constate l'absence de microfilaires de W. bancrofti et 0. volvu- lus chez 13 (46,4%) des 28 sujets elephantiasiques depistes. Par contre, tous les aveugles et tous les porteurs de kystes, sauf un, ont presente une biopsie dermique positive, ce qui traduit la fidelite reconnue de cette technique pour le depistage de l'oncho- cercose. INTRADERMOREACTION Chez les sujets positifs Le pourcentage moyen de reactions positives a ete de 71,5% (maximum: 84,6% chez les porteurs de D. perstans seule; minimum: 55,0% chez les porteurs de 0. volvulus et D. perstans). Si on considere les porteurs d'une seule espece de filaire (tableau 2), les resultats ne different pas selon la filaire en cause (X2=1,018 pour 2 degres de liberte, P >0,50). Par contre, si on considere les porteurs de plusieurs filaires associees - La 1'excep- tion des porteurs de 0. volvulus+ W. bancrofti dont l'effectif est trop faible (tableau 2) - on constate que les resultats varient d'une categorie 'a l'autre (X2 =6,508 pour 2 degres de liberte, 0,05 >P >0,02). Cela est dit La un fort deficit de reactions positives en cas d'association 0. volvulus+D. perstans, sans qu'une explication satisfaisante puisse etre donnee. En ce qui concerne l'age, le pourcentage de reac- tions positives n'est pas different dans les trois premiers groupes d'age, mais on constate une legere diminution du nombre de reactions positives dans le groupe 4 (tableau 4) qui pourrait traduire une baisse de la reactivite allergique ou l'apparition d'une anergie au-delLa d'un certain age. Certains auteurs ont observe une croissance de la positivite en fonction de l'age (Desowitz et al., 1966; Ciferri et al., 1965), avec un tres faible pourcentage de reactions positives chez les sujets les plus jeunes. La structure que nous avons adoptee pour les groupes d'age permet difficilement de comparer nos resultats it ceux de ces auteurs, d'autant plus que dans notre premier groupe d'age (groupe 1), 4 sujets seulement sur 32 etaient ages de 8 ans ou moins. Les resultats etudies en fonction du sexe n'ont pas revele de difference significative. Ce fait a d'ailleurs ete observe par de nombreux auteurs, notamment par Ciferri et al., 1965; Desowitz et al., 1966; Ata et al., 1967. Enfin, si on etudie les resultats en fonction de la localite, on note un net deficit de r6actions positives dans deux des villages (Banankeledaga et Samandeni) dif essentiellement La la frequence de l'association 0. volvulus+D. perstans pour laquelle nous avons observe le plus fort pourcentage de reactions nega- tives (voir ci-dessus). Chez les sujets negatifs Chez 54,9% de ces sujets, le test cutane a ete positif. Rappelons La ce propos que Desowitz et al. (1966) ont constate, d'une part que dans une zone indemne de filariose tous les sujets testes donnaient une reaction negative, i l'exception de ceux ayant sejourne un an ou plus dans une zone d'endemie filarienne, et d'autre part que I'antigene utilise semblait specifique du groupe des filaires car il ne donnait notamment pas de reaction chez les sujets porteurs d'helminthes intestinaux. Le fort pourcentage de sujets negatifs La intra- dermoreaction positive semble indiquer qu'en fait ces sujets ont ete soumis La une infection filarienne qui ne peut etre mise en evidence par les methodes parasitologiques ou cliniques usuelles. Contrairement La ce que l'on a observe chez les sujets positifs, on constate ici une forte augmentation du pourcentage de reactions positives en fonction de l'age (tableau 4) dans les trois premiers groupes d'age. Par contre, comme chez les sujets positifs, le pourcentage de reactions positives diminue dans le quatrieme groupe, probablement pour les memes raisons. Cette augmentation du pourcentage de reactions positives en fonction de l'age chez les sujets negatifs, qui est parallele Li l'augmentation du pourcentage de sujets cliniquement ou parasitologiquement positifs en fonction de I'age, semble confirmer le fait que 840 ESSAI DE DEUX TESTS IMMUNOLOGIQUES POUR LE DEPISTAGE DES FILARIOSES l'intradermoreaction permettrait de detecter des sujets non depistes par les examens usuels. Comme chez les sujets positifs, on n'a pas observe de difference significative entre les sexes. Enfin signalons que tant chez les sujets positifs que chez les sujets negatifs ages de plus de 22 ans (groupes 3 et 4), le pourcentage des intradermoreac- tions positives est sensiblement le meme. FIXATION DU COMPLEMENT Alors que chez les sujets positifs nous avons eu seulement 34,5% de reactions positives, nous avons obtenu 38,2% de reactions positives chez les sujets negatifs. Ces deux pourcentages ne sont d'ailleurs pas significativement differents. Aucune difference n'a e constatee, tant chez les sujets positifs que negatifs, en relation avec le sexe et l'age. Par contre, les resultats varient considerablement suivant l'espece de filaire en cause. Dans le cas des porteurs d'une seule espece de filaire (tableau 2), les resultats different significativement d'une categorie a l'autre (X2 = 12,980 pour 2 degres de liberte, 0,01 > P > 0,001): 10,4 % seulement de reactions posi- tives chez les porteurs de W. bancrofti seule, 60,0% chez les porteurs de 0. volvulus seule. Les associations de filaires donnent des resultats intermediaires, fonction de la presence ou de l'ab- sence de 0. volvulus ou de W. banctofti (tableau 2). La predominance de l'une de ces filaires explique egalement les resultats differents observes dans cha- cune des localites. I1 apparait donc que c'est dans l'onchocercose que cette reaction donne les meilleurs resultats. Ceci est peut-etre dQ au fait que, dans le cas de W. bancrofti et D. perstans, il se produit une certaine neutralisation des anticorps circulants par les nombreuses microfi- laires sanguicoles (ComiteOMS d'experts de l'Immu- nologie des Maladies parasitaires, 1965). COMPARAISON ENTRE L'INTRADERMOREIACTION ET LA REACTION DE FIXATION DU COMPLtMENT Si on considere l'ensemble des sujets positifs (tableau 3), il ressort que l'intradermoreaction donne des resultats nettement superieurs a la reaction de fixation du complement (71,5% d'intradermoreac- tions positives pour 34,5% de fixations du comple- ment positives). Par contre, si on etudie separement les resultats obtenus dans chacune des trois localites, on constate que l'intradermoreaction donne les meilleurs resultats a Tingrela oiu predomine W. ban- crofti (82,9% d'intradermoreactions positives et 16,3% de fixations du complement positives), tandis que la reaction de fixation du complement donne des resultats superieurs a l'intradermoreaction a Saman- deni ofu predomine 0. volvulus (58,4% d'intradermo- reactions positives; 70,1 % de fixations du comple- ment positives). CONCLUSION L'intradermoreaction, bien que donnant un fort pourcentage de resultats positifs (environ 75%) chez les sujets depistes par les methodes parasito- logiques et cliniques usuelles, ne peut etre utilis'e seule pour le diagnostic des filarioses du fait de ses defaillances chez environ le quart des sujets filariens confirmes. Par contre, son interet essentiel semble resider dans le fait qu'elle permettrait de detecter des sujets suspects mais faiblement infectes, pour lesquels le diagnostic n'a pu etre etabli avec l es methodes classiques. Ces conclusions paraissent valables pour les trois filaires que nous avons etudiees. En ce qui concerne la reaction de fixation du com- plement, il semble que l'on puisse tirer des conclu- sions analogues en limitant l'emploi de la methode au depistage de l'onchocercose. Toutefois, le choix d'une autre dilution de serum, ou d'une autre con- centration de l'antigene pourrait peut-etre apporter de sensibles ameliorations au rendement de cette methode et permettre d'etendre eventuellement son utilisation au ddpistage d'autres filarioses. Rappelons notamment que Rosseau-Baelde & Janssens (1961) ont obtenu de bons r6sultats dans le diagnostic de diverses filarioses en utilisant d'autres antigenes sui- vant une technique legerement diffdrente. REMERCIEMENTS Nous tenons a exprimer nos vifs remerciements au Dr Ansari et au Dr Kent, Organisation mondiale de la Sante, Geneve, au Professeur Sawada, Ecole de Medecine, Universite de Gunma, Maebashi, Japon, et a M. P. Sales, Adjoint au Chef de la Section Documentation du Centre Muraz, OCCGE, Bobo-Dioulasso, Haute-Volta. 841 842 R. GIDEL, J. BRENGUES & F. RODHAIN SUMMARY EVALUATION OF TWO IMMUNOLOGICAL TESTS (SKIN AND COMPLEMENT-FIXATION) FOR THE DETECTION OF FILARIASIS IN POPULATIONS IN UPPER VOLTA WHERE WUCHERERIA BANCROFTI, ONCHOCERCA VOLVULUS AND DIPETALONEMA PERSTANS OCCUR TOGETHER At the request of WHO, 2 immunological tests (skin and complement-fixation) were evaluated for the detection of filariasis caused by Wuchereria bancrofti, Onchocerca volvulus and Dipetalonema perstans in the south-west of Upper Volta. The antigens used were those developed by Sawada from adult worms of Dirofilaria immitis. The tests were made at night on 369 subjects from 3 villages. One village was in an area with relatively little but mixed infection and served as a control, another village was in an area predominantly infected by W. bancrofti, and the third was in an area in which 0. volvulus was predominant. All subjects were given preliminary clinical and parasi- tological examinations, including thick blood smears and skin biopsies; 71.5% of those parasitologically or clinical- ly positive and 54.9% of those negative had a positive skin reaction. When carriers ofa single species of filaria are con- sidered, the results were much the same for all 3 species. The skin test therefore cannot be used to identify the 3 species of filaria studied since about one-quarter ofthe sub- jects with confirmed filariasis had negative skin reactions. On theotherhand, the large percentage ofpositive reactions observed in subjects parasitologically negative does not imply a lack of specificity of the antigen but rather that the subjects living in an endemic area are in fact infected, but too weakly for the infections to be detected by the usual means. Altogether, 34.5% of subjects parasitologically or clinically positive and 38.2% of those negative gave posi- tive complement-fixation reactions but these results varied with the species of filaria concerned. There were 10.4% of positive reactions in subjects carrying W. bancrofti alone and 60% in those carrying 0. volvulus alone. Thus the complement-fixation test gives weak reactions with microfilariae of the blood (W. bancrofti and D. perstans) but acceptable results with microfilariae of the skin (0. volvulus). This test, subject to some improvements, could have a value comparable to the skin test, at least in 0. volvulus infections. The results of the 2 tests were not influenced by the sex of the subject; they did, however, show variations between the 3 villages according to the species of filaria or the predominant type of filarial association. Thus, where W. bancrofti was predominant, the skin test gave the best results while the complement-fixation test was more satisfactory where 0. volvulus was most frequent. No variation with age was seen in the complement- fixation test, neither in subjects positive nor in those negative clinically and parasitologically. The same was true of the skin test in parasitologicallj positive subjects but a big increase in positive reactions was observed with this test according to the age of parasitologically negative subjects. RIEFIRENCES BIBLIOGRAPHIQUES Ata, A. E.-H. A., El Raziky, E. S. H., El Abdin, A. Z., El Kaliouby, A. H. & Meshriky, S. (1967) J. trop. Med. Hyg., 70, 113-116 Aubreville, A. 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