Procedimento operacional padrão para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS Versão: Paper-Impreg/01/14 January 2022
1POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 1. Introdução, âmbito e finalidade Este procedimento operacional padrão (POP) descreve o processo de impregnação de papéis de filtro com inseticidas e sinergistas, a serem utilizados nos testes de tubo da Organização Mundial da Saúde (OMS), para testar a suscetibilidade dos mosquitos adultos aos inseticidas. Destina-se principalmente aos investigadores envolvidos na validação das concentrações discriminatórias e não se destinada ao uso pelos programas nacionais para o monitoramento de rotina da resistência aos inseticidas. A qualidade dos papéis impregnados afetará os resultados dos testes de tubo da OMS e, consequentemente, a comparação dos resultados ao longo do tempo e entre localidades. Para minimizar o risco de tal variabilidade nos resultados, os programas devem adquirir papéis de filtro impregnados com as concentrações discriminatórias validadas de diversos inseticidas, assim como os kits para a condução dos testes de tubo da OMS, da Unidade de Investigação do Controle de Vetores da Universiti Sains Malaysia (USM) (http://www.inreskit.usm.my). 2. Insumos balança (de precisão 0,01 mg), espátulas e barquinhas de pesagem para pesar o inseticida (micropratos de pesagem em alumínio) refrigerador para armazenar os papéis de filtro impregnados câmara de exaustão para todo o trabalho com inseticidas frascos de vidro, tampas e rótulos conjunto de micropipetas calibradas (ex.: 100 µL, 200 µL e 1000 µL) para preparar soluções estoque pipetas de vidro de 2 mL para impregnar os papéis cordão e suporte na câmara de exaustão para secar os papéis de filtro (opcional) suporte para os papéis (opcional: não pode ser adquirido e deve ser produzido localmente, exemplo na Fig. 1) POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 2 3. Reagentes e consumíveis cortador de papel para cortar os papéis de filtro no tamanho adequado lápis para marcar os papéis de filtro lixeiras, se necessário marcadores de tinta permanente papéis de filtro Whatman n.º 1 (número de catálogo 1001 917) ponteiras de plástico descartáveis para as micropipetas (ex.: 100 µL, 200 µL e 1000 µL) pipetas de vidro descartáveis de volumes variados acetona (de grau analítico ou mais pura) folha de alumínio para manter os papéis de filtro secos e/ou para embrulhá-los para armazenar inseticida de grau técnico ou ingrediente ativo do inseticida (IA) óleos carreadores (consultar a Tabela 1) rolo de papel (opcional) lenços umedecidos com isopropanol a 70 % (para limpar a câmara de exaustão) produto de limpeza antibacteriano, por exemplo, álcool isopropílico ou etanol a 70 % TFD4 ou Decon 90 (para limpar equipamentos em contato com compostos químicos) 3POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 4. Saúde, segurança e proteção ambiental Antes de utilizar qualquer composto químico, a equipe do laboratório deve ler e compreender a avaliação de riscos, as fichas de informação de segurança do material e o controle de substâncias perigosas para a avaliação de saúde para cada químico utilizado. Equipamento de proteção individual adequado deve ser usado sempre que se manuseiam inseticidas, incluindo jaleco, luvas, óculos de proteção e máscara facial ao pesar produtos químicos. Garantir que todas as áreas de trabalho estão livres de outros materiais antes de impregnar os papéis. Toda equipe que trabalha no laboratório deve ter recebido treinamento inicial e o treinamento deve estar registrado na pasta individual de treinamentos. Toda equipe que utiliza este procedimento deve estar treinada na operação segura das câmaras de exaustão química. Eliminar adequadamente todos os resíduos, seguindo as orientações de segurança nacionais/institucionais. 5. Cálculos para preparo da solução para impregnação de papéis 5.1. Selecione o óleo carreador adequado para a preparação da solução de solvente para o inseticida a ser impregnado no papel de filtro Whatman nº 1 (Tabela 1). 5.2. Anote o grau de pureza do IA a ser usado para a impregnação. Esta informação é essencial para calcular a quantidade exata de IA. 5.3. Escolha a concentração final de IA na solução de óleo carreador e/ou solvente necessária para impregnar os papéis de filtro (Tabela 1). Prepare as soluções estoque iniciais com a concentração mais elevada e depois faça diluições em série para obter as concentrações seriadas necessárias. Os cálculos para a quantidade de IA, solvente e óleo carreador para preparar a solução estoque inicial e subsequentes diluições para as concentrações seriadas são apresentados no Anexo 1 deste POP. POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 4 Tabela 1. Inseticida e óleo carreador necessário para impregnar papéis Classe de inseticida/sinergista Inseticida/sinergista Óleo carreador/ solvente necessários Organofosforados (OP) Malationa Óleo de oliva e acetona Clorpirifos-etil Pirimifos-metil Apenas acetonaa Carbamatos (C) Bendiocarbe Óleo de oliva e acetona Piretroides (PY) Permetrina 40:60 Óleo de silicone (fluido de grau cosmético Dow Corning 556) e acetona Deltametrina Lambda-cialotrina Alfa-cipermetrina Controle dos organofosforados (OP) N/A Óleo de oliva e acetona Controle dos carbamatos (C) N/A Apenas acetona Controle dos piretroides (PY) N/A Óleo de silicone (fluido de grau cosmético Dow Corning 556) e acetona Sinergista Butóxido de piperonil (PBO) Óleo de silicone (fluido de grau cosmético Dow Corning 556) e acetona a Note que, embora no passado o óleo de oliva fosse recomendado como óleo carreador, nenhum óleo carreador deve ser utilizado, segundo as instruções do fabricante (o pirimifos-metil é fornecido em estado líquido e é misturado com a acetona para tratar facilmente os papéis ); NA – não aplicável Notas: i. Um óleo carreador permite que uma camada homogênea, fina e estável de IA se espalhe no papel de filtro e evita a cristalização do IA, normalmente sólido em temperatura ambiente. As concentrações são geralmente expressas como percentagem do IA por unidade de volume do óleo carreador no papel de filtro (a acetona é volátil). O pirimifos-metil é uma exceção, por se encontrar em estado líquido; é misturado somente com acetona como solvente, não requerendo qualquer óleo carreador para impregnação do papel. Logo, a sua concentração é expressa como a quantidade de inseticida em mg por m2. ii. De acordo com os cálculos apresentados no Anexo 1: a. Para os compostos destinados a serem misturados com óleo de silicone (fluido de grau cosmético Dow Corning 556), i.e., os piretróides e o PBO, os papéis de filtro Whatman nº 1 são impregnados com 3,6 mg (densidade do óleo 0,980) do óleo carreador/cm², i.e., 648 mg por 180 cm² de papel de filtro, ou 0,66 mL de óleo de silicone por papel, considerando a densidade de 0,98 do óleo de silicone. (Nota: verifique sempre a densidade do óleo para o cálculo ser correto.) Assim, um papel de filtro com 180 cm² impregnado com concentração de 1 % contém 6,61 mg de IA grau técnicoa, ou 367,22 mg de IA/m². b. Para os inseticidas destinados a serem misturados com óleo de oliva, i.e., os organofosforados e os carbamatos, os papéis são impregnados com 3,6 mg de óleo carreador/cm², i.e., 648 mg de óleo/180 cm² de papel, ou 0,71 mL de óleo de oliva/papel, considerando a densidade de 0,91 do óleo de oliva. (Nota: verifique sempre a densidade do óleo para o cálculo ser correto.) Assim, um papel de filtro com 15 cm x 12 cm (180 cm²) impregnado com concentração de 1 % contém 7,12 mg de IA grau técnico, ou 395,6 mg de IA /m². 5POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS iii. Se a diluição em série for necessária para a obtenção da concentração de inseticida desejada, considere o seguinte exemplo: se a solução estoque tem uma concentração de 95 % e a concentração final necessária para o teste é de 0,001 %, a melhor prática é preparar uma solução estoque de 1 % e diluí-la com solução solvente (uma mistura de óleo carreador e acetona ou somente acetona para o pirimifos-metil – consulte o Anexo 1) até 0,05 % e desta até a diluição final de 0,001 %. Lembre-se de não diluir diretamente de 1 % para 0,001 %. iv. Quantidades pequenas de IA, por exemplo menos de 10 mg (0,01 g), são extremamente difíceis de pesar com precisão em uma microbalança. Um método de preferência consiste em pesar uma quantidade aproximada da IA (ligeiramente acima da quantidade necessária) e ajustar o volume da solução solvente (óleo e acetona ou somente acetona) de acordo com o peso atual de IA. v. Se a acetona e os óleos carreadores são mantidos em condições de frio (4–8o C), coloque-os em temperatura ambiente, deixando os frascos fechados em repouso por até 1 hora. A abertura direta de frascos frios resultará na condensação de vapores de água, o que pode afetar a estabilidade do IA no papel impregnado. 6. Preparação de equipamentos, consumíveis, reagentes e área de trabalho Nota: use equipamento de proteção individual adequado no laboratório. 6.1. Verifique o registro de limpeza para garantir a descontaminação da câmara de exaustão e da área a ser utilizada para tratar os papéis. 6.2. Prepare todo o equipamento e consumíveis necessários (consulte a lista “Equipamentos, reagentes e consumíveis” fornecida no início deste POP). 6.3. Pendure o cordão na câmara de exaustão para secar os papéis após impregnação. Utilize sempre cordão e suportes novos e limpos para cada lote de papéis preparados, ou organize folhas de alumínio em uma superfície horizontal para colocar os papéis para secar. 6.4. Registre todos os detalhes dos equipamentos, reagentes e consumíveis a serem utilizados na preparação dos papéis impregnados no formulário de registro. 6.5. Identifique os frascos necessários para as soluções estoque e soluções finais com o nome do IA, concentração, data, tipo de solvente/óleo carreador e o nome do técnico de laboratório que as preparou. 7. Pesagem do inseticida/sinergista A solução estoque de solvente e óleo carreador (exceto para o pirimifos-metil) necessária para todas as diluições deve ser preparada em frascos de vidro dentro de uma câmara de exaustão. (Por exemplo, para impregnar papéis com piretroides e PBO, misture 66 mL de óleo de silicone com 134 mL de acetona para preparar 200 mL de solução solvente; para impregnar papéis com organofosforados ou carbamatos, misture 71 mL de óleo de oliva com 129 mL de acetona para preparar 200 mL de solução solvente). POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 6 7.1. Calibre a balança com a porta da câmara de pesagem fechada. Coloque um micro prato de pesagem de alumínio ou pedaço de folha de alumínio (para uma quantidade pequena de IA) ou o frasco da solução estoque (para uma quantidade grande de IA) na balança e ajuste/tare. 7.2. Pese a quantidade de IA necessária utilizando uma pipeta se o IA do teste for líquido (ex.: pirimifos-metil; PBO), ou uma espátula se o IA for um pó. Coloque a quantidade de IA/sinergista no recipiente de pesagem (micro prato de pesagem, folha de alumínio ou frasco) e feche a porta para verificar o peso. Se necessário, adicione mais IA até atingir a quantidade aproximada pretendida. Aperte o botão da impressora da balança e depois o sinal de impressão na balança para obter a data, hora e quantidade pesada. Imprima uma cópia e anexe à folha de registro. Se a balança não estiver conectada a uma impressora, anote em um livro do laboratório. Registre o peso real de IA/sinergista na tabela de cálculos e ajuste os volumes da solução estoque. 7.3. Coloque o micro prato de pesagem de alumínio com o IA ou sinergista num frasco de vidro para preparar a solução estoque inicial. 7.4. Usando uma pipeta, acrescente o volume necessário de solução solvente (acetona + óleo) ou acetona (para o pirimifos-metil) no frasco estoque contendo o IA ou sinergista e misture/vortexe bem até a total homogeneização. (Nota: mantenha o micro prato na solução estoque até a completa dissolução do IA). Repita as etapas 7.1–7.4 se mais de 1 concentração teste de IA ou sinergista for requerida. 7.5. Prepare as soluções de diluição de acordo com a planilha de cálculos (Anexo 1). Nota: Garanta sempre que luvas separadas sejam usadas para os diferentes IA ou sinergistas e nunca manuseie papéis com luvas contaminadas. 8. Corte e preparação dos papéis de filtro Whatman 8.1. Utilizando um cortador de papel, corte o número suficiente de pedaços de papel de filtro Whatman nº 1 com 12 cm x 15 cm. Nota: cuidado com os dedos e mãos nas arestas afiadas do cortador. 8.2. Em cada papel a ser impregnado, escreva a lápis o nome do inseticida ou sinergista e a concentração em porcentagem na metade inferior do papel, ao longo da margem com 12 cm. Para os papéis controle, escreva a classe de inseticida (designadamente, controle dos PY, controle dos OP, controle dos C). Os papéis estão, agora, prontos para serem impregnados. 7POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 9. Procedimento para a impregnação dos papéis 9.1. Calce luvas e coloque um papel no suporte com o selo ou identificação virado para baixo (Fig. 1). Nota: Sempre faça a impregnação dos papéis controle primeiro, usando o mesmo solvente que será utilizado para impregnar os papéis com inseticida/sinergista Fig 1. Papel de filtro sustentado pelos pinos metálicos de um suporte para impregnação Fonte: fotografia cortesia do Institut de Recherche pour le Développement, Montpellier, França 9.2. Agite bem a solução ou coloque no agitador vortex por 10 segundos antes de impregnar o papel; se a mesma solução for usada para impregnar mais de 1 papel, a solução deve ser vortexada antes de cada impregnação. 9.3. Para impregnar cada papel, devem ser utilizados 2 mL da solução estoque final. Utilizando uma pipeta de vidro, aspire lentamente 2 mL da solução estoque. Feche o frasco da solução estoque para evitar a evaporação da acetona e abra novamente apenas quando estiver pronto para aspirar a solução para tratar o papel seguinte. POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 8 9.4. Para impregnar o papel, libere lentamente a solução sobre ele, movendo a ponta da pipeta em linhas, até a superfície do papel estar totalmente tratada. Para garantir a impregnação uniforme da superfície do papel, não volte a tratar a mesma linha/coluna. Não toque no papel com os dedos durante o processo. Não coloque os papéis impregnados uns em cima dos outros. Se os 2 mL de solução acabarem antes que toda a superfície de 12 x 15 cm do papel de filtro tiver sido impregnada, elimine esse papel de forma segura e impregne um novo. Nota: Quando os papéis precisarem ser impregnados com concentrações seriadas de inseticida/sinergista, sempre comece a tratar os papéis com a concentração mais baixa e trate os outros papéis com concentrações em série mais elevadas, usando as mesmas luvas e pipetas. Sempre troque as luvas e pipetas entre o manuseio de papéis com inseticidas diferentes. 9.5. Deixe o papel impregnado secar sobre folha de alumínio ou no suporte de metal (Fig. 1), em temperatura ambiente e no escuro, durante 24 horas. Garanta que os papéis impregnados não se sobreponham/toquem uns nos outros. Coloque os papéis controle para secar em local separado. Não deixe os papéis de filtro secar durante um período muito longo, uma vez que vários inseticidas químicos se deterioram rapidamente com a exposição à luz do dia. 9.6. Se os papéis impregnados ou os papéis controle não forem utilizados imediatamente após o período de secagem, usando o equipamento de proteção individual adequado, embrulhe-os em folha de alumínio previamente identificada(Figs. 2 e 3). Para isso, pegue 2 papéis impregnados com a mesma concentração/óleo carreador de cada vez, posicione-os de tal forma para que os lados impregnados dos papéis fiquem virados um para o outro, enquanto as identificações são visíveis pela parte de fora. Depois disso, embrulhe-os em folha de alumínio e coloque em saco plástico ou recipiente fechado, para armazenar em refrigerador a 4–8 °C, para uso futuro. Não armazene além do prazo de validade recomendado (Tabela 2). Identifique cada pacote envolto em alumínio com detalhes, tais como o nome do inseticida/sinergista, % da concentração, data da impregnação, número de papéis que contém e nome do técnico que impregnou os papéis. Faça primeiro os pacotes dos papéis controle, seguidos dos papéis com inseticida/sinergista, começando pelos papéis com as concentrações mais baixas. Um lote com o número de papéis necessários para 1 teste de resistência pode ser armazenado em cada saco plástico ou recipiente hermeticamente fechado. Nota: Garanta que as luvas sejam trocadas entre o empacotamento de diferentes compostos e sempre embrulhe papéis do mesmo composto em série, das concentrações menores para as maiores. Fig. 2. Exemplo de rótulo Nome do inseticida e concentração/Controle: N.º de papéis: Data da impregnação (dd/mm/aaaa): Data de validade (dd/mm/aaaa): Iniciais do operador do teste: 9POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS Fig. 3. Papéis impregnados embrulhados em folha de alumínio, com rótulo com a informação necessária Fonte: fotografia cortesia do Institut de Recherche pour le Développement, Montpellier, França Tabela 2. Prazo de validade dos diferentes papéis impregnados Classe Inseticida Prazo de validade em condições ótimas de armazenamento no frio (4–8 oC) Estabilidade de armazenamento acelerado (54 ± 2 °C durante 2 semanas ou 40 ± 2 °C durante 8 semanas) Organoclorados p,p’-DDT 5 anos Estável Organofosforados Malationa 3 anosa Estável Pirimifos-metil 3 anosa - Carbamatos Bendiocarbe 3 anosa - Propoxur 3 anosa - Piretroides Alfa-cipermetrina 2 anosb Estável Ciflutrina 2 anosb Estável Deltametrina 2 anosb Estável Etofenprox 2 anosb Estável Lambda-cialotrina 2 anosb Estável Permetrina 2 anosb Estável Sinergistas Butóxido de piperonil 3 anosb Estável a Tentativa (necessita reconfirmação) b Relatório da OMS, 2021 (1) POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 10 10. Processo de limpeza Utilize o método que se segue, se possível • Limpe o interior da câmara de exaustão e a balança com lenços umedecidos com isopropanol a 70 %. Garanta que todos os suportes de metal para secagem dos papéis sejam deixados de molho para descontaminação, durante o tempo adequado, conforme descrito abaixo. • Descontaminação: deixe de molho de um dia para o outro em descontaminante – solução alcalina a 20 % (TFD4 ou Decon 90) se o equipamento estiver em contato direto com o inseticida, ou em solução a 10 %, para equipamentos usados no manuseio. No dia seguinte, enxague 3 vezes com água da torneira e seque em temperatura ambiente. • As bancadas e equipamentos fixos devem ser descontaminados com etanol. Nota: as soluções de descontaminação a 20 % e 10 % devem ser trocadas pelo menos uma vez por mês, ou mais frequentemente, se necessário. 11. Agradecimentos A OMS agradece as contribuições do Dr. Vincent Corbel, Mr Stephane Duchon e Ms Laura Andreo, do Instituto de Pesquisas para o Desenvolvimento, de Montpellier, França, e da Dr.ª Rosemary Lees, da Escola de Medicina Tropical de Liverpool, Reino Unido da Grã Bretanha e Irlanda do Norte, pelo esboço deste POP. A revisão e harmonização deste POP foram feitas por Ms Lucia Fernandez Montoya, do Programa Global de Malária, da OMS, Genebra, Suíça. O OMS também gostaria de agradecer à Dr.ª Cynara Rodovalho e Mr Diogo Bellinato, do Laboratório de Fisiologia e Controle de Artrópodes Vetores da Fundação Oswaldo Cruz (Fiocruz) no Brasil, e à Sra. Sónia Casimiro Trigo, do Escritório da OMS em Moçambique, por sua contribuição para a versão em português deste documento. O desenvolvimento deste POP foi coordenado pelo Dr. Rajpal S. Yadav, do Departamento de Controle das Doenças Tropicais Negligenciadas, da OMS, Genebra, Suíça. 12. Referências 1. Determinar concentrações discriminatórias de inseticidas para a monitorização da resistência em mosquitos: relatório de um estudo laboratorial multicêntrico com recomendações de consultas da OMS. Genebra, Organização Mundial da Saúde, 2022 https://apps.who.int/iris/handle/10665/352616, acedido a 27 de maio de 2022). Para mais informações, por favor contate: vectorsurveillance@who.int POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 11 Anexo 1. Cálculos para as soluções para impregnar papéis de filtro para os testes de tubo da OMS A. Cálculos para impregnar de óleo de transporte papéis de filtro n.º 1 da Whatman A planilha de cálculos Excel está disponível online em: https://cdn.who.int/media/docs/default-source/ntds/vector-ecology-mangement/calculation-tables-paper-impregnation-bottles-17jan2022-locked.xlsx Na planilha Excel, ao introduzir os valores nas células verdes, os valores das células brancas serão calculados automaticamente. . Cálculo para o peso do IA em g ajustado para a porcentagem de pureza Cálculo para o peso do IA em mg (ajustado para a pureza do IA) Cálculo para o teor de IA no papel impregnado por m2 Grupo da classe do inseticida Óleo carreador Inseticida ou sinergista Concentração pretendidado IA em % # N.º de papéis a serem tratados Peso de óleo por papel (mg) Peso total de óleo necessário para todos os papéis a serem tratados (g) Densidade do óleo & Volume de óleo (mL) Volume de acetona (mL) Volume total de óleo + acetona (mL) Quantidade de IA necessária (g) Pureza do IA (%) Quantidade de IA a ser pesada (g)* Peso exato do IA (g)** Volume total ajustado de acetona + óleo (mL)*** Quantidade de IA a ser pesada (mg)* Peso exato do IA (mg)** Volume total ajustado de acetona + óleo (mL)*** Area of 1 filter paper of 15 cm x 12 cm (m) Quantidade de IA por unidade de superfície Em g/m2 Em mg/m2 a b c d = (b c)/1000 e f = d / e g = (b 2)-f h = f + g i = (a x f ) /100 j k = i x (100/j) l m = ( l x h ) / k n = k x 1000 o p = (o x h ) / n q r = (i / b ) / q r x 1000 OP/C Óleo de oliva 1 1 648 0,648 0,910 0,712 1,29 2 0,0071 99,1 0,0072 0,0072 2,00 7,19 10 2,78 0,018 0,39560 395,60 Controle 1 648 0,648 0,910 0,712 1,29 2 PY Óleo de silicone 1 1 648 0,648 0,980 0,661 1,34 2 0,0066 99,4 0,0067 0,00 6,65 10 3,01 0,018 0,36735 367,35 Controle 1 648 0,648 0,980 0,661 1,34 2 OC Óleo Risella DDT 4 1 648 0,648 0,806 0,804 1,20 2 0,0322 79,06 0,0407 0,00 40,68 10 0,49 0,018 1,78660 1786,60 Controle 1 648 0,648 0,806 0,804 1,20 2 Sinergista Óleo de silicone PBO 1 1 648 0,648 0,980 0,661 1,34 2 0,0066 99,3 0,0067 0,00 6,66 10 3,00 0,018 0,36735 367,35 Controle 1 648 0,648 0,980 0,661 1,34 2 IA – ingrediente ativo do inseticida ou sinergista OP/C – organofosforado ou carbamato PY – piretroide OC – organoclorado # em mg de IA por unidade de volume de óleo (p/v) & sempre verifique a densidade do óleo segundo as especificações do fabricante * peso ajustado para a porcentagem de pureza do IA ** peso exato de IA mostrado na balança electrônica *** use 2 mL do volume total da solução final para impregnar um papel com tamanho 15 x 12 cm POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 12 B. Cálculos para impregnar papéis de filtro Whatman nº1 sem óleo (exemplo, pirimifos-metil) A planilha de cálculos Excel está disponível online em: https://cdn.who.int/media/docs/default-source/ntds/vector-ecology-mangement/calculation-tables-paper-impregnation-bottles-17jan2022- locked.xlsx Na planilha Excel, ao introduzir os valores nas células verdes, os valores das células brancas serão calculados automaticamente. Cálculo para o peso do IA ajustado para a porcentagem de pureza (em g) Cálculo para o peso do IA em mg Grupo da classe do inseticida Inseticida Concentração pretendida de IA no papel N.º de papéis a serem tratados Área de 1 papel de filtro de 15 cm x 12 cm (m ) Quantidade de IA para o número de papéis a serem tratados (g) Pureza do IA do inseticida (%) Volume total de solvente (acetona) (mL) Quantidade de IA a ser pesada (g)** Peso exato do IA (g)*** Volume total ajustado de solvente (acetona)* (mL) Quantidade de IA a ser pesada (mg)** Peso exato de IA (mg) *** Volume exato de solvente (acetona)* (mL)em mg/m2 em g/m2 a a/1000 b c d = (a/1000) x c x b e f = b x 2 g = d x (100 / e) h i = ( h x f ) / g j= g x 1000 k l = ( k f ) / j OP Pirimifos-metil 100,00 0,10000 1 0,018 0,0018 90,5 2 0,001989 0,02 20,11 1,99 20 20,11 Controle 1 0,018 2 IA, ingrediente ativo OP, organofosforado * use 2 mL do volume total da solução final para impregnar um papel com tamanho 15 x 12 cm ** considerando a pureza do IA *** peso exato do IA mostrado na balança electrônica 13 POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS C. Diluições da solução estoque com acetona ou acetona + óleo carreador para preparar concentrações seriadas de inseticidas para impregnação de papéis de filtro A planilha de cálculos Excel está disponível online em: https://cdn.who.int/media/docs/default-source/ntds/vector-ecology- mangement/calculation-tables-paper-impregnation-bottles-17jan2022-locked.xlsx Na planilha Excel, ao introduzir os valores nas células verdes, os valores das células brancas serão calculados automaticamente. a. Sem óleo carreador, i.e., somente acetona (exemplo, pirimifos-metil) Concentração final de IA (mg/m²) ** Volume final de acetona (mL)* Concentração de IA da solução estoque inicial (mg/m²)** Volume a ser pipetado da solução estoque inicial (mL) Volume (mL) de acetona a ser adicionado a b c d = (a x b)/c e = b - d Solução estoque* 100 Diluição em série n.º 1 50 10 100 5,00 5,00 Diluição em série n.º 2 30 10 100 3,00 7,00 Diluição em série n.º 3 20 10 100 2,00 8,00 Diluição em série n.º 4 10 10 100 1,00 9,00 Diluição em série n.º 5 5 10 100 0,50 9,50 b. Com óleo carreador e acetona Concentração final de IA (µg/frasco) Volume final de acetona + óleo (mL)* Concentração de IA da solução estoque inicial (µg/frasco) Volume a ser pipetado da solução estoque inicial (mL) Volume de acetona + óleo a ser adicionado (mL) a b c d = (a x b)/c e = b - d Stock solution* 0,5 Diluição em série n.º 1 50 10 0,5 4,00 6,00 Diluição em série n.º 2 30 10 0,5 2,00 8,00 Diluição em série n.º 3 20 10 0,5 1,60 8,40 Diluição em série n.º4 10 10 0,5 1,00 9,00 Diluição em série n.º5 5 10 0,5 0,40 9,60 IA – ingrediente ativo * a solução estoque inicial é preparada pesando a quantidade adequada de IA e ajustando o volume necessário de acetona somente ou de acetona + óleo Nota: prepare o volume final de acordo com o número de papéis a serem impregnados (ex.: para impregnar 4 papéis de uma dada concentração, prepare pelo menos 10 mL de solução para compensar uma eventual perda de solução durante o procedimento) ** as concentrações de IA são apresentadas em mg/m2 (e não em porcentagens), já que não é utilizado óleo POP para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS 14 Procedimento operacional padrão para a impregnação de papéis de filtro para testar a suscetibilidade de mosquitos adultos a inseticidas em testes de tubo da OMS [Standard operating procedure for impregnation of filter papers for testing insecticide susceptibility of adult mosquitoes in WHO tube tests] ISBN 978-92-4-007917-5 (versão electrónica) ISBN 978-92-4-007918-2 (versão impressa) © Organização Mundial da Saúde 2023. Alguns direitos reservados. Este trabalho é disponibilizado sob licença CC BY-NC-SA 3.0 IGO. A menção de determinadas companhias ou do nome comercial de certos produtos não implica que a Organização Mundial da Saúde os aprove ou recomende, dando-lhes preferência a outros análogos não mencionados. Salvo erros ou omissões, uma letra maiúscula inicial indica que se trata dum produto de marca registado.