Diagnostic immuno-enzymologique (ELISA) des maladies parasitaires par une microméthode modifiée : 2 :résultats pour la toxoplasmose, l'amibiase, la trichinose, l'hydatidose et l'aspergillose

Bulletin de l'Organisation mondiale de la Sante, 56 (5): 797-804 (1978) Diagnostic immuno-enzymologique (ELISA) des maladies parasitaires par une micromethode modifi'e 2. Resultats pour la toxoplasmose, l'amibiase, la trichinose, 1'hydatidose et I'aspergillose PIERRE AMBROISE-THOMAS,1 PIERRE T. DESGEORGES,2 & D. MONGET3 Une micromethode immuno-enzymologique (ELISA ) utilisje depuis 1976 pour -le serodiagnostic de maladies parasitaires semble presenter une valeur particuliere. Diffirents controles au moyen de tests serologiques comparatifs ont confirme son excellente specificite. En outre, son extreme sensibilit permet l'usage de quantites infimes de reactifs antigeniques. Les resultats obtenus demandent neanmoins a' itre encore verifies a' partir de series plus nombreuses d'examens. Dans l'histoire de chaque nouveau test serologique, les applications parasitologiques ont g6n6ralement ete parmi les derni6res. C'est au contraire en para- sitologie que le test ELISA a trouve quelques-unes de ses premieres et meilleures indications (10, 15), sa sensibilite elev6e lui permettant d'etre r6alis6 avec d'infimes quantit6s de r6actifs antig6niques. Depuis 1976, nous avons pu appliquer cette reaction a dix parasitoses diff6rentes et c'est sa valeur diagnostique pour cinq d'entre elles (toxoplasmose, amibiase, trichinose, hydatidose et aspergillose) que nous presentons ici. MATERIELS ET MtTHODES Test ELISA II a et realise suivant les modalites decrites precedemment (3). Les antigenes suivants ont &6 utilises: Toxoplasma gondii, antigene soluble, Institut Pasteur; Entamoeba histolytica, antigene soluble, Behring; Trichinella spiralis, antigEne prepare Ai l'Institut national de Sante publique, Bilthoven, Pays-Bas; Echinococcus granulosus, liquide hydatique recueilli chez des moutons parasites et contr0le par immuno6lectro- 1 Professeur de parasitologie a la Facult6 de Medecine de Grenoble, France. 2 Assistant de parasitologie a la Faculte de Medecine de Grenoble, France. 3 Laboratoire de Biologie, Institut national des Sciences appliquees, Villeurbanne, France. phorese; Aspergillus fumigatus, antig6ne somatique, extrait de cultures. Pour chacune des cinq parasitoses, les serums etudi6s ont 6te pr6lev6s chez des patients suivis sur le plan clinique et parasitologique. Testes en ELISA aux dilutions 1/20, 1/40 etc..., tous ces serums ont ete parall6lement etudies par un ou plusieurs autres tests s6rologiques (immunofluorescence indirecte, hemagglutination conditionnee, immunoelectropho- r~se). Pour les controles, on a utilise dans chaque cas 25 serums de sujets sains (temoins n6gatifs) et, pour 1'6tude des reactions croisees, 18 a 26 serums pr6lev6s chez des malades atteints de diverses parasitoses profondes (tableau 1). Tests serologiques comparatifs Immunofluorescence indirecte. Suivant une tech- nique classique (1), cette re'action a e pratiquee sur tous les serums etudi6s. Comme antigene, on a utilise suivant les cas des suspensions parasitaires (T. gondii, E. histolytica) ou des coupes a la conge- lation (muscles de rats parasites par T. spiralis, scolex d'E. granulosus provenant de sable hydatique, reins de lapins inocules avec A. fumigatus). Hemagglutination indirecte, double diffusion en gelose et immunoelectrophorese. Ces tests ont ete' utilises respectivement pour I'amibiase (reactifs Behring) et pour I'aspergillose pulmonaire (antigene somatique prepare au laboratoire). 3746 - 797 - P. AMBROISE-THOMAS ET AL. Tableau 1. Contr6les de sp6cificitd: nature chacun des 5 antig6nes parasitaires et nombre des s6rums 6tudi6s face b Antigbnes S6rums Toxoplasma Entamoeba Trichinella Echinococcus Aspergillus gondii histolytica spiralis granulosus fumigatus Paludisme 7 7 1 1 1 Amibiase 7 1 1 1 Toxoplasmose 6 1 1 1 Ascaridiose 1 1 5 5 1 Toxocarose 1 4 2 1 Trichinose 1 1 2 1 Filariose (loase) 1 2 5 4 1 Fasciolase 1 2 2 Clonorchiase 1 Bilharziose intestinale 1 1 2 4 1 Hydatidose 1 1 2 1 Aspergillose 1 2 1 Candidoses 1 2 1 1 8 Cryptococcose 1 Total 23 23 26 23 18 RESULTATS Controles de specificite Des contr6les (antig6nes + substrat ou antigenes + conjugue anti-globulines + substrat) ont 6t6 regulierement realises a chaque serie d'examens. On n'a jamais observe dans ces cas des densites optiques (DO) depassant 0,02. Le tableau 2 rapporte par ailleurs les r6sultats des contr6les de specificite avec les differents serums temoins heterologues dilues a 1/20. Les DO corres- pondantes sont toutes tres inferieures a celles que l'on observe avec les moins positifs des serums homologues. Ceci, pour les systemes antigene- anticorps explores, traduit une bonne sp6cificit6 de la technique. Une importante exception concerne cependant les DO elevees (0,72 a 1,20) obtenues avec quatre serums de loase face a l'antigene E. granulosus. Cette constatation demeure actuelle- ment inexplicable si l'on considere les tres faibles similitudes antigeniques entre Loa loa et E. granu- losus, avec lequel des parasites zoologiquement et antigeniquement beaucoup plus proches (Fasciola hepatica, Schistosoma mansoni) n'ont donne que de faibles reactions croisees (DO entre 0,08 et 0,28). I1 a ete impossible de verifier que les Africains chez lesquels les serums anti-Loa loa avaient 'te preleves 6taient bien indemnes de toute hydatidose. Tous les serums utilises pour les contr6les de specificit6 ont ete par ailleurs etudies a la dilution de 1/80. Les DO maximales correspondantes sont indiqu6es dans le tableau 3. Presentation des resultats Le test ELISA permet un double systeme de representation des resultats que nous avons utilise pour les cinq parasitoses etudiees. Titre final de positivite. Determine a partir d'une gamme de dilutions (1/20, 1/40 etc...) des serums testes, ce titre correspond a l'inverse de la plus forte dilution donnant encore un resultat positif, c'est-a- dire une DO superieure a la plus forte DO observ6e avec les serums de contr6le dilues a 1/20. Densite optique mesurke pour une seule dilution. Ce type de mesure a l'avantage de permettre un important gain de temps et de reactifs. I1 presente en revanche certains inconvenients que nous envi- sagerons plus loin. Comme dilution unique, nous avons choisi 1/80 qui parait ecarter le plus grand 798 MALADIES PARAS1TAIRES: ELISA Tableau 2. Moyennes et valeurs extr6mes des densit6s optiques mesur6es avec les s6rums h6t6rologues de contr6le dilu6s A 1/20 Antigbnes S6rums Toxoplasma Entamoeba Trichinella Echinococcus Aspergillus gondii histolytica spiralis granulosus tumigatus Paludisme 0,11 0,05 0,03 a 0,23 a 0 a(0,09 A 0,23) (0 A 0,08) Amibiase 0,11 0,03 a 0,10a 0,02 a(0,03 A 0,1 8) Toxoplasmose 0,04 0,02 a 0,08 a o,o4 a(0 A 0,10) Ascaridiose 0,14a 0,04a 0,03 0,12 0,04a(0,02 A 0,04) (0,09 A 0,23) Toxocarose 0,14 a 0,03 0,20 0,04 a(0,02 A 0,04) (0,1 8 A 0,23) Trichinose 0,16 a 0,03 a 0,09 0,04 a(0,08 A 0,1 0) Filariose (loase) 0,14a 0,02 0,14 0,84 0,01 a(0,01 A 0,03) (0 A 0,38) (0,72 A 1,20) Fasciolase 0,13 a 0,32 0,14(0,29 A 0,43) (0,1 0 b 0,1 8) Clonorchiase 0,08 a Bilharziose 0,07 a 0,15 a 0,03 0,12 0,02 a intestinale (0,03 b 0,04) (0,08 A 0,28) Hydatidose 0,22 a 0,16 a 0,03 0 a(0,03 A 0,04) Aspergillose 0,18 a 0,09 0,02 a(0,04 A 0,1 5) Candidoses 0,16 a 0,01 o a 0,10 a 0,03 profondes (0 A 0,03) (0 A 0,06) Cryptococcose 0,03 a a Valeur unique. nombre de reactions crois6es. Comme seuil accep- table de specificite, on a retenu dans chaque cas une DO superieure de 0,02 aux DO maximales observees avec les serums heterologues. Tableau 3. Valeurs maximales des densit6s optiques (DO) obtenues dans les contr8les de spkcificit6 avec les s6rums h6t6rologues dilu6s A 1/80 DO maximales avec lesAntigAnes s6rums h6t6rologues dilu6s Toxoplasma gondii 0,12 Entamoeba histolytica 0,18 Trichinella spiralis 0,08 Echinococcus granulosus 0,39 Aspergillus fumigatus 0,14 Toxoplasmose (tableau 4) Dans l'ensemble, l'immunofluorescence indirecte (IFI) et le test ELISA fournissent des resultats comparables, surtout si l'on rapproche les titres d'anticorps fluorescents et les DO (Fig. 1). Cette constatation rejoint celle d'autres auteurs et notam- ment de Walls et al. (16), Bout et al. (5) et Voller et al. (13). En principe, celle-ci laisse bien augurer de la valeur de l'ELISA pour le serodiagnostic de la toxoplasmose humaine mais avec cependant diverses reserves. II est en effet toujours hasardeux de vouloir comparer des methodes faisant appel a des antigenes tres diff6rents: parasites entiers pour 1'IFI qui explore par consequent surtout les antigenes de surface; extraits antigeniques <i solubles > pour le test ELISA. En ce qui concerne cette derniere r6action, les resultats obtenus sont bien entendu 79W P. AMBROISE-THOMAS ET AL. Tableau 4. Toxoplas-mose: comparaison de l'immuno- fluorescence indirecte (IFI) et de I'ELISA IFI ELISA (10 ug d'antigbne/ml) Titre Titre Do a Toxoplasmoses 1/20 1/320 0,27 anciennes 1/20 1/320 0,31 1/20 1/320 0,27 Toxoplasmoses 1/200 1/320 0,26 6volutives 1/200 1/20 0,09 1/200 1/80 0,20 1/200 1/320 0,46 1/400 1/80 0,21 1/400 1/320 0,22 1/400 1/320 0,30 1/800 1/320 0,25 1/800 1/80 0,20 1/800 1/320 0,34 1/1200 1/5120 0,85 1/800 1/80 0,20 1/1600 1/1280 0,34 1/3200 1/5120 0,60 1/3200 1/1280 0,62 a Mesuree A la dilution de 1/80 des s6rums; limite de sp6cificit6: DO = 0,14. 1 80r '1,60 - 1,40 < 1,20,- -J uJ cu 1,000 CT a,D 0,80- 0,60 0,40 : 0 0 0 0 0 0 0 8 8 0 0, 0 0 0 0 0 0 0 20 ^~~~~~~~~~~~~~I I' /I I 0 1/20 1/200 1/400 1/800 1/1600 1/3200 1/6400 Titre IFI Fig. 1. S6rodiagnostic de la toxoplasmose: r6sultats compares de l'ELISA et de l'immunofluorescence indirecte. Tableau 5. Amibiase: comparaison de l'immunofluores- cence indirecte (IFI), de l'hemagglutination condition- nee (IHA) et de l'ELISA ELISA Peroxydase, Orthotolidine S6rums IFI IHA (5 jg d'antigbne/ml) Densit6 Titre optique au 1/80a Amibiases 1/50 1/320 1/20 0,14 anciennes 1/50 1/64 0 0,04 1/50 1/256 0 0,07 1/50 1/16 1/20 0,12 1/50 1/16 1/20 0,09 Amibiases 1/100 1/128 1/80 0,24 intestinales 1/100 1/128 1/320 0,46 1/100 1/32 1/80 0,31 1/100 1/16 0 0,05 1/200 1/16 1/20 0,10 1/200 0 1/20 0,15 1/200 1/512 1/80 0,34 Amibiases 1/400 1/32768 1/1280 0,85 h6patiques 1/400 1/4096 1/320 0,78 1/400 1/284288 1/1280 1,40 1/800 1/16 1/80 0,45 1/800 1/64 1/80 0,21 a Limite de spkcificit6: DO = 0,18. fonction du type d'antigene employe, comme cela est egalement le cas pour l'hemagglutination condi- tionnee et pour la fixation du complement. Sur la base de ces resultats preliminaires encou- rageants, une etude plus complete est actuellement en cours pour explorer, en ELISA, diff6rents types d'antigenes ou de fractions antigeniques solubles et aboutir a une expression des resultats en unites internationales. Amibiase (tableau 5) Des tudes preliminaires sur l'application du test ELISA en amibiase ont ete realis6es notamment par Bos et al. (4) et par Voller et al. (14). D'apres ces derniers auteurs, la r6action aurait surtout une valeur diagnostique interessante dans les atteintes hepatiques. C'est ce que semble confirmer nos propres resultats. Notre etude a en effet port' sur trois categories de serums, respectivement preleves dans des cas d'amibiases anciennes, dans des formes intestinales pures ou dans des amibiases hepatiques associees ou non 'a une atteinte colique. En ELISA, les resultats sont habituellement negatifs dans les amibiases anciennes, surtout si 1'on considere la densite optique apres dilution au 1/80 des serums. 800 MALADIES PARASlTAIRES: ELISA Tableau 6. Trichinose: comparaison de l'immuno- fluorescence indirecte (IFI) et de l'ELISA ELISA (5 gg d'antigbne/ml) S6rums IFI Densit6 Titre optique au 1/80 a Trichinoses 1/10 1/80 0,14 probables 1/20 0 0,01 0 1/80 0,20 0 1/80 0,13 1/80 0 0,03 1/20 1/80 0,09 1/40 1/80 0,08 1/20 0 0,03 1/20 1/320 0,14 1/40 1/1280 0,21 1/40 1/80 0,08 1/20 0 0,01 Trichinoses 1/20 1/5120 0,10 humaines 1/20 1/5120 0,43 prouv6es 1/160 1/5120 0,80 a Limite de spkcificit6: DO = 0,10. Le test est a cet egard relativement proche de l'IFI (atteignant tout juste la limite de specificit6 de 1/50) et s'oppose au contraire a l'IHA qui tend a rester longtemps positive, meme dans les formes anciennes. Pour les amibiases purement intestinales, les resultats de l'ELISA ne sont qu'inconstamment et de toute facon moder6ment positifs. La aussi, la similitude avec les donnees de l'immunofluorescence indirecte est parfaite. Enfin, dans les amibiases hepatiques, les titres et surtout les densites optiques observ6es sont particulierement 6lev6s. Le test prend donc toute sa valeur lorsqu'il s'agit de reconnaitre des localisations visc6rales - h6patiques en parti- culier - oit la serologie est d'autant plus pr6cieuse que les investigations parasitologiques sont g6n6ra- lement en d6faut. Trichinose (tableau 6) Compte tenu de la rarete de la trichinose humaine et porcine en France, nos r6sultats sont 6videmment bien moins nombreux que ceux pr6sent6s par d'autres auteurs et notamment Engvall et al. (7) et surtout Ruitenberg et al. (11, 12). Pour notre part, nous n'avons pu etudier que 15 serums correspondant a 3 cas humains de trichi- nose prouvee et a 12 suspicions de trichinose (epid6miologie, clinique, hyper6osinophilie sanguine, resultats en immunofluorescence indirecte). I1 n'existe pas de correspondance nette entre les resultats de l'immunofluorescence indirecte et ceux Tableau 7. Hydatidose: comparaison de l'immuno- fluorescence indirecte (IFI) et de l'ELISA ELISA Peroxydase, Orthotolidine (2 jAg d'antigbne/ml) S6rums IFI Dilution Densit6 optique au 1/80 a Hydatidoses 1/10 1/80 0,45 probables 1/10 1/320 1,38 1/20 1/20 0,28 Hydatidoses 1/20 1/1280 1,37 h6patiques 1/20 1/320 1,40 confirm6es 1/40 1/80 0,75 1/40 1/1280 1,30 1/40 1/1280 1,45 1/80 1/5120 1,40 1/80 1/1280 1,32 1/80 1/1280 1,25 1/80 1/320 1,15 1/80 1/1280 1 1/160 1/5120 1,10 1/160 1/320 0,98 1/320 1/5120 1,35 1/640 1/5120 1,32 a Limite de spkcificit6: DO = 0,41. du test ELISA. Ce dernier parait cependant pre- senter une valeur diagnostique considerablement plus elev6e que la recherche des anticorps fluores- cents. I1 faut en effet remarquer que, dans les trois cas de trichinose prouv6e, les titres et les DO sont tres elev6s en ELISA alors que les resultats de l'IFI n'atteignent que juste la limite de specificit6 dans deux cas et, pour le troisieme serum, ne pr6- sentent qu'une positivit6 relativement moder6e (1/160). Hydatidose (tableau 7) Actuellement, il semble que les seules applications de 1'ELISA au serodiagnostic de l'hydatidose aient ete publiees par Bout et al. (5) et par Farag et al. (8). Nos resultats concernent 3 hydatidoses pro- bables et 14 hydatidoses h6patiques prouvees. Ils confirment la valeur du test ELISA qui, dans tous les cas confirm6s, donne des titres d'anticorps et des DO tres eleves. Ceci laisse particuli6rement bien augurer de la valeur diagnostique du test, qui n'exige que d'infimes quantites d'antigene hydatique (21tg/ml). Aspergillose (tableau 8) Le diagnostic serologique de l'aspergillose est souvent difficile dans la mesure oh des tests comme l'immunofluorescence indirecte sont expos6s I des 801 P. AMBROISE-THOMAS ET AL. Tableau 8. Aspergillose: comparaison de l'immunofluorescence indirecte (IFI), de l'immunodiffusion suivant la technique d'Ouchterlony (ID), de l'immuno6lectrophor6se (IEP) et de I'ELISA IFI ID IEP ELISA (5 i&g d'antigbne/ml) S6rums Titre Nombre Nombre Titre Densit6 d'arcs d'arcs optique au 1/802 Suspicions 1/20 0 0 1/20 0,12 d'aspergillose 1/20 0 0 1/20 0,08 1/20 0 0 1/20 0,07 1/40 0 0 1/20 0,02 1/40 1 1 1/20 0,04 Aspergilloses 1/80 0 0 1/320 0,70 pulmonaires 1/80 3 3 1/320 1,30 confirm6es 1/80 0 0 1/5120 0,30 1/160 0 0 1/1280 0,90 1/40 5 3 1/80 1,05 1/80 3 3 1/320 1,30 1/160 5 4 1/1280 1,18 1/160 4 3 1/1280 1,20 1/160 4 4 1/320 0,80 1/160 6 3 1/1280 1,10 1/320 2 3 1/1280 0,85 1/320 5 5 1/1280 0,85 1/320 10 8 1/1280 1,20 1/640 7 7 1/1280 1,02 1/640 7 7 1/1280 1,10 a Limite de sp6cificit6: DO = 0,16. risques d'erreurs par exces (reactions faussement positives) et que, inversement, l'immunodiffusion (Ouchterlony) ou l'immunoelectrophorese sont d'in- terpretation indiscutable quand elles sont positives mais restent exposees 'a des erreurs par defaut (resultats faussement n6gatifs). Ceci rend donc tres souhaitable l'apport de nouveaux tests, et Hommel et al. (9) ont rapport6 l'interet du test ELISA. Nos resultats - pour 5 suspicions d'aspergillose et 15 aspergilloses pulmonaires verifi6es - confirment absolument ces conclusions. La reaction ELISA est en effet, dans tous les cas prouves, intensement positive aussi bien en titres qu'en DO a la dilution de 1/80. Ce resultat parait d'autant plus remarquable que pour un de ces serums l'IFI n'est que faiblement positive (1/20), voisine de sa limite de specificite, et que dans 3 cas l'immunodiffusion et l'immuno- electrophorese ont ete totalement negatives. CONCLUSION Dans 1'ensemble, le test ELISA constitue indiscu- tablement un apport extremement prometteur pour le s6rodiagnostic des maladies parasitaires. Les resultats obtenus demandent neanmoins a etre encore verifies 'a partir de series plus nombreuses d'examens et pour diff6rentes formes cliniques de chaque para- sitose (hydatidoses hepatiques ou pulmonaires, par exemple). En fait, le principal point 'a pr6ciser concerne les antigenes employes. Dans la mesure, en effet, oLi le test fait appel 'a des extraits parasitaires dont la nature et la qualit6 peuvent varier largement, il importe de definir exactement les caracteristiques des meilleurs antigenes et, quand cela est possible, de preciser les resultats obtenus a partir de fractions antigeniques specifiques de chaque parasite. Jusqu'ici, l'emploi de tels antigenes en pratique diagnostique constituait plus un espoir qu'une r6alit6 accessible a un grand nombre de laboratoires. Cette situation est maintenant totalement modifiee par un test comme l'ELISA qui, contrairement aux titrages radio-immunologiques, n'exige aucun reactif ou appareillage particulier et dont l'extreme sensibilit6 permet neanmoins l'usage d'infimes quantites d'antigenes. Une autre perspective interessante est apport6e par la possibilit6 de mesurer la densite optique pour une seule dilution des s6rums 6tudi6s. Ceci entraime un gain considerable de temps et de reactifs et peut theoriquement fournir une notion quantitative plus exacte que les habituelles gammes de dilution. Dans ce domaine, une prudence certaine est cependant encore necessaire. En effet, comme le soulignent 802 MALADIES PARASITAIRES: ELISA 630 nm I~~~~~ 0) CL 0 cl °o CN °c ° Dilutions _ ~~~~~~~~~WHO78359 Fig. 2. Courbe des densites optiques en fonction de la dilution. Bullock & Walls (6) et ainsi que le confirment pleinlement nos r6sultats, les DO mesur6es pour difftrentes dilutions d'un s6rum se r65partissent sur une sinusoide et non pas sur une droite (Fig. 2). I1 est donc impossible de d6duire le titre final (inverse de la plus forte dilution encore positive) d'un serum 'a partir de la DO mesur6e pour une dilution donn6e. En outre, dans chaque systeme antigene-anticorps, le choix de la dilution retenue pour l'unique mesure de DO est absolument fon- damental et ne peut resulter de donnees empiriques. Une premiere solution, proposee d'ailleurs par Bullock & Walls (6), est de mesurer les DO de trois dilutions differentes et suffisamment espac6es pour couvrir respectivement trois secteurs de la sinusolde (courbe des DO en fonction de la dilution). Une autre possibilite- que nous 6tudions actuellement pour la toxoplasmose - est de realiser une veritable gamme d'etalonnage au sens colorim6trique du terme, avec les DO obtenues 'a partir de solutions contenant un nombre variable d'unites internatio- nales anti-toxoplasmes. En rapportant a ce graphique la DO d'un serum a une dilution donnee, il semble que l'on puisse avec une pr6cision tres satisfaisante en deduire le nombre d'unites intemationales contenues dans ce serum. Bien evidemment, une telle solution n'est actuellement envisageable que pour la toxoplasmose, qui est la seule parasitose pour laquelle on dispose de serums etalons titr6s en unites internationales. Si nos resultats en ELISA se trouvaient confirmes, ils apporteraient un nouvel argument en faveur de l'adoption, pour toutes les parasitoses, de serums de r6f6rence contenant un nombre connu d'unites internationales. REMERCIEMENTS Nous remercions vivement le Professeur Michel Quilici de la Faculte de Medecine de Marseille, qui a bien voulu mettre a notre disposition, dans notre etude, les antigenes hydatiques et une partie des immunserums correspondants. Enfin, ce travail a ete realise avec la collaboration technique de Mlie M. M. Lombard. SUMMARY DIAGNOSIS OF PARASITIC DISEASES BY ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) WITH A MODIFIED MICROMETHOD: RESULTS FOR TOXOPLASMOSIS, AMOEBIASIS, TRICHINOSIS, HYDATIDOSIS, AND ASPERGILLOSIS A micromethod of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), previously described, was used from 1976 onwards for the serodiagnosis of five parasitic diseases. In each case, we measured the optical densities obtained with different dilutions (1: 20, 1: 40, and so on) of sera obtained from patients under clinical and parasitological surveillance. In addition, specificity was checked each time with 25 negative sera from healthy persons and 18-26 sera from patients with various serious parasitological conditions. Finally, a parallel study was made of all the sera by means of comparative serological tests, indirect immunofluorescence, passive haemag- glutination and/or immunoelectrophoresis. Taken as a whole, the various checks confirmed the excellent specificity of the ELISA test under the con- ditions and with the antigens used. This reaction has a 803 804 P. AMBROISE-THOMAS ET AL. particularly high diagnostic significance. As regards the five parasitic conditions studied, it was in fact invariably positive in all cases of active or old toxoplasmosis, hepatic amoebiasis (the test was negative in 1 of 7 cases of purely intestinal amoebiasis) and in all proven cases ofhepatic hydatidosis, trichinosis, or aspergillosis. Finally, it is possible that the precise measurement of optical densities at one or two dilutions of the sera as studied may provide sufficiently quantitative results to replace the complete ranges of serum dilutions, with determina- tion of a final titre. This system needs further investiga- tion but seems particularly suitable for toxoplasmosis if the results are expressed in international units based on the WHO reference serum. BIBLIOGRAPHIE 1. AMBROISE-THoMAs, P. Etude sero-immunologique de dix parasitoses par les techniques d'immuno- fluorescence. These Sciences, Lyon, 1969. 2. AMBROISE-THOMAS, P. & KIEN TRUONG, T. Fluores- cent antibody test in amebiasis. Clinical applications. American journal of tropical medicine and hygiene, 21: 907-912 (1972). 3. AMBROIsE-THoMAS, P. & DESGEORGES, P. T. Diag- nostic immuno-enzymologique (ELISA) des maladies parasitaires par une micromethode modifiee. 1. Modalit6s techniques. 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