Utilisation de sondes à ADN pour la détermination de la prévalence de l'infection dans des lots de simulies : protocole d'études sur la Bougouriba à Zambo

UTILISATION DE SONDES A ADN POUR LA DETERMINATION DE I-A PREVALENCE DE L"INFECTION DANS DES LOTS DE SIMULIES Protocole d'études sur la Bougouriba à Zambo 225/YCU /TEC/3.1,5 Introduction I-es évaluations entomologiques classsiques sont consommatrices de temps, d'argent et nécessitent non seulement un savoir faire mais aussi beaucoup de sacrifice de la part du personnel. Dans le contexte de la dévolution, si on veut utiliser les études entomologiques comme un moyen de détection de la recrudescence, une simplication poussée de la méthode s'impose. La technique mise au point par l'équipe du Dr T. Unnasch (Université d'Alabama) pour la détermination de la prévalence de l'infection dans des lots de simulies est une étape importante dans la simplification des études du niveau d'infectivité des mouches. Lors de la dernière réunion interne tenue à Ouagadougou les 16 et 17 mars dernier, il a été recommandé notamment d'étudier l'infectivité des simulies 5 à 7 ans après l'arrêt des épandages larvicides en utilisant la technique de l'équipe du Dr Unnasch. L'étude sur la Bougouriba, dans la région de Zambo, qui n'est plus traitée depuis septembre 1990 se place dans ce contexte et devrait nous permettre d'avancer dans la détermination des critères entomologiques à retenir éventuellement dans le cadre de la surveillance de la recrudescence. La Bougouriba est une région où les enquêtes effectuées en juillet 1994 ont indiqué la persistance d'une transmission "résiduelle" dont le niveau mériterait d'être connu. Mode opératoire A. Types de captures et de dissection a) Captures "particulières" le premier jour Ce type de captures sera assuré (le premier jour de la période d'étude seulement) par des captureurs de l'équipe de lutte antivectorielle de la DPS du Houet à Bobo Dioulasso en parallèle avec les captures villageoises. I-es captures seront faites entre 8h 00 et L7h 00 avec une interruption de 12 heures à L3 heures. b) Captures type "post-traitement" Elles seront réalisées par des captureurs villageois qui seront, dans un premier temps, supervisés par un captureur de l'équipe de lutte antivectorielle. Les captures commenceront à 8 heures et s'achèveront à 17 heures avec une interruption d'une heure de 12 heures à 13 heures. On capturerait ainsi dans la journée un maximum de simulies pares. r.a a' 2 Dans la journée, au moins l0 Vo des femelles capturées (au moins 50 simulies) seront disséquées. Les têtes du restant des captures seront'détachées du thora"x et préservées pour être envoyées à la DPS du Houet à Bobo Dioulasso puis au laboratoire ADN de Bouaké par Ia première occasion. Iæs captures de la journée seront mises ensemble avant de prélever la partie à disséquer. B. Préservation des larves et simulies Toutes les larves rencontrées chez une simulie seront conservées à sec entre lame et lamelle en suivant le protocole déjà établi. - si seules des I.T sont trouvées, on les préservera entre lame et lamelle (une seule lame). - si en plus des I.T on a des Lth, Iz et L1, on les préservera sur la même lame en mettant les I.T sous une lamelle et les autres larves sous une autre lamelle. - les débris de l'abdomen (ovaires et tubes de malpigi) seront montés à sec également sur la même lame que les L"T s'il n'y a que ces larves, et sur une deuxième lame si des I.T et d'autres stades larvaires sont trouvés dans la femelle. Toutes les lames devront porter les informations suivantes : - Point de capture - Date de capture - Numéro de la femelle sur la fiche 2A - Nature et nombre des infections préservées et/ou identification morphologique de la femelle. Pour les simulies non disséquées, les têtes seront détachées du thora:r à l'aide des aiguilles de dissection et préservées dans des flacons contenant de l'alcool à 80 Vo (tn flacon par journée de capture). I-es flacons seront bien étiquetés (point de capture, date de capture, nombre de têtes, observations éventuelles). Deux fiches d'information devront être remplies pour chaque lot d'échantillons envoyé au labo de Bouaké : une fiche pour les infections (fiche ADN 01) et une autre pour les flacons contenant les têtes de simulies. Cette dernière comportera 1a date de capture, le nombre de femelles capturées, le nombre de têtes préservées, le nombre de femelles disséquées, le nombre de pares,la répartition des espèces (morpho.) et le nom du point de captures. -' C. Fréouence des caotures I-es captures seront réalisées quatre (4) jours dans la semaine pour permettre d'avoir un échantillon statistiquement fiabte. [.a durée totale des captures sera de seize (16) semaines couvrant ainsi une grande partie de la période habituelle de transmission (de juillet à octobre 1995). D. Envoi des échantillons à Bouaké Les lames portant les infections, les flacons contenant les têtes de simulies et les fiches seront envoyées régulièrement à la DPS du Houet à Bobo Dioulasso où elles seront vérifiées par le Chef de l'équipe de lutte antivectorielle. Celui-ci regroupera les échantillons reçus du terrain et procèdera à leur envoi au labo ADN de Bouaké. I-es résultats des dissections de même qu'une copie des informations destinées au labo ADN de Bouaké seront envoyés à VCU Ouaga. Movens losistiques Comme indiqué dans la lettre d'accord signée entre I'OCP et le Ministère de la Santé du Burkina Faso, il sera mis à la disposition de l'équipe de lutte antivectorielle de Ia DPS du Houet à Bobo Dioulasso, un véhicule Toyota Hilux 4 x 4 supplémentaire (avec chauffeur) pour la durée de l'étude. Par ailleurs, un des véhicules déjà mis à la disposition de la DPS sera utilisé dans le cadre de cette étude, portant ainsi à deux le nombre de véhicules Toyota 4 x 4 qui serviront à la réalisation de I'étude à Zambo. Un de ces véhicules se chargera du transport des captureurs de Zambo au point de captures tandis que l'autre assurera la liaison entre Diébougou et Bobo Dioulasso. Moyens humains Quatre captureurs villageois payés par le Programme de même qu'une partie du personnel de l'équipe de lutte antivectorielle de la DPS du Houet (deux auxiliaires de laboratoire/techniciens, un chauffeur et deux captureurs) participeront à l'étude. Destinataire : Chef équipe lutte antivectorielle, DPS, Bobo cc: Chef VCU Chef DEVO CBIS CEEH CNI lZone Est Chef IRU, Bouaké Chef Labo ADN, Bouaké a4 ETUDE SPECIALE ZAMBO/RIVIERE BOUGOURIBA Date Nb fem. capturées Nb têtes préservées Nb fem. disséq. Nb pares Nb avec 14T Semaine: JL Capture villageoise J2 Capture villageoise J3 Capture villageoise J4 Capture üllageoise Semaine : J1 Capture villageoise J2 Capture villageoise J3 Capture villageoise J4 Capture villageoise Semaine: J1 Capture villageoise J2 Capture villageoise J3 Capture villageoise J4 Capture villageoise Semaine : JL Capture villageoise J2 Capture villageoise J3 Capture villageoise J4 Capture villageoise Semaine : JL Capture üllageoise J2 Captttre villageoise J3 Capture villageoise J4 Capture villageoise