VERSION 1 – EFFECTIVE DATE: 01/01/2016 COLLECTION OF FINGER-PRICK BLOOD AND PREPARATION OF THICK AND THIN BLOOD FILMS MALARIA MICROSCOPY STANDARD OPERATING PROCEDURE – MM-SOP-05A 1. PURPOSE AND SCOPE To describe the procedure for collecting blood from a finger prick and preparing thick and thin blood films for malaria diagnosis by light microscopy. This procedure is to be modified only with the approval of the national coordinator for quality assurance of malaria microscopy. All procedures specified herein are mandatory for all malaria microscopists working in national reference laboratories, in hospital laboratories or in basic health laboratories in health facilities performing malaria microscopy. 2. BACKGROUND Examination of blood films by microscopy is a basic technique, which remains the gold standard for the diagnosis of malaria. Blood films for malaria diagnosis are best prepared from capillary blood obtained by a finger prick. Good-quality blood films are essential to establish accurate diagnoses. 3. SUPPLIES AND MATERIALS • cleaned glass slides, 25 x 75 mm, with one frosted end for labelling, preferably with ground edges, and of good quality (See MM-SOP-01: Cleaning and storing microscope slides); • 70% ethyl alcohol or alcohol swabs; • sterile lancets, one per patient; • dry cotton (cotton ball, swab or gauze); • protective latex gloves (powder free); • a biohazard container or any puncture-resistance sharps container (See MM-SOP 13: Management of wastes generated from malaria diagnostic tests); • an infectious wastes container (See MM-SOP 13: Management of wastes generated from malaria diagnostic tests); • a slide tray or box and a cover to dry slides horizontally, protected from dust and flies; • a drying rack; • record forms (i.e. malaria register) and • a lead pencil or permanent marker pen. 4. SAFETY PRECAUTIONS • Wear protective latex gloves before starting blood collection and when handling slides, for personal protection and to avoid leaving oil on the slide that may interfere with the smear preparation. Wear gloves when handling blood, and remove them before leaving the work area or when writing notes. • Always use a new lancet for each patient. Do not recap the lancets. Never re-use lancets. • Avoid getting blood, wet or dry, on your fingers or hands. • Cover cuts or abrasions on your hands with a waterproof dressing. • Avoid accidentally pricking yourself when handling sharp instruments that have been in contact with blood. 2MM–SOP–05A: COLLECTION OF FINGER-PRICK BLOOD AND PREPARATION OF THICK AND THIN BLOOD FILMS • Thoroughly wash your hands with soap and water as soon as you finish a job. • If you get blood on your skin, quickly wipe it off with a cotton swab dampened with alcohol; then wash the affected area with soap and water as soon as possible. • Sharps such as lancets and broken glass must be discarded in a “sharps” container for safe disposal by incineration or autoclaving. Materials that are not sharp but are contaminated with blood must be discarded in a covered pan or autoclave bag for safe disposal by incineration or autoclaving. • Collect blood in an area where there is proper lighting. 5. PROCEDURE FLOW CHART DESCRIPTION OF ACTIVITY ILLUSTRATION 1. Label the slide with the patient’s details and record in the register. 2–3. Wearing latex gloves, clean the third finger from the thumb with 70% ethanol or an alcohol swab. Let the finger dry in air. 4. Prick the finger with a new, sterile lancet. 5–6. Express the first drop of blood and wipe it off with dry cotton. 7. Express and touch the blood with the slide to collect a small drop of blood, and use it to make the thin film. 1. Label the frosted end of the glass slide with the patient’s details, and document in record form or a malaria register. See SOP 06: Labelling malaria blood films. 2. Wearing protective latex gloves, select the third finger from the thumb of the non- dominant hand (or big toe for infants, not the heel). Do not use the thumb for either children or adults. 3. Hold the patient’s hand, palm facing upwards, and clean the selected finger with a piece of cotton soaked lightly in 70% ethanol or alcohol swab. Use firm strokes to remove dirt and oil from the ball of the finger and to stimulate blood circulation. Make sure the finger is warm by applying gentle massage if required. Let the alcohol dry from the finger. 4. Using a new, sterile lancet and a quick rolling action, puncture the centre of the ball of the finger or toe. 5. Apply gentle pressure to the finger (or toe), and express the first drop of blood. 6. Wipe the first drop of blood off with dry cotton, making sure that no cotton strands remain on the finger that might stick to the blood. 7. Working quickly and handling the slides only by the edges, collect blood by applying gentle pressure to the finger and touching the slide to the blood; collect a single small drop of blood on the middle of the slide for the thin film. 3MM–SOP–05A: COLLECTION OF FINGER-PRICK BLOOD AND PREPARATION OF THICK AND THIN BLOOD FILMS FLOW CHART DESCRIPTION OF ACTIVITY ILLUSTRATION 8. Collect two or three more small drops of blood, and use them to make the thick film. 9. Wipe the remaining blood from the finger. 10. Place the slide with the blood facing up on a flat surface. 11–13. Using a clean “spreader” slide, make the thin film by pushing forwards the one drop of blood in a smooth, continuous motion. 14. With the corner of the “spreader”, make the thick film by swirling the three drops of blood together to form a circle. 15. Air-dry in a horizontal position. A slide dryer may be used if rapid drying is required. 8. Apply further gentle pressure to express more blood, and collect two or three drops on the slide about 1 cm from the drop intended for the thin film. 9. Wipe the remaining blood from the finger with clean, dry cotton. 10. Do not pause between applying and spreading the drops. Prepare the blood films with the slide lying on a flat surface. 11. To prepare the thin film, place the edge of a clean “spreader” slide at 45o in front of the blood drop intended for the thin film. 12. Slowly pull the “spreader” back until it touches the drop of blood and the blood spreads along the edge of the “spreader”. 13. Rapidly push the “spreader” forwards (away from the centre) in a smooth, continuous motion, until the spreader leaves a “feathery” end for the thin film. 14. With the corner of the same “spreader” used for making the thin film, make the thick film by swirling the three drops of blood together forming a circle of about 1 cm in diameter size. Do not stir the blood. A circular or rectangular film can be made by three to six quick strokes with the corner of the spreader. 15. After preparing the thin and thick blood films, allow them to dry in air in a horizontal position on a slide tray. If rapid drying is required, dry the films with low heat from a hair-dryer for 5 s, at a distance of 30 cm. Do not place the slides too close to the dryer, as the films might become heat fixed. 4MM–SOP–05A: COLLECTION OF FINGER-PRICK BLOOD AND PREPARATION OF THICK AND THIN BLOOD FILMS 6. PROCEDURE NOTES • The thick film should be dried flat and be protected from dust and flies. • The thick film may autofixate if exposed to extreme heat and should therefore be stained immediately. • The thick film can be dried gently with a hair-dryer set at warm or another drying method, but care must be taken to avoid heat fixation, which can occur quickly. Issue a hair-dryer only to technicians who have demonstrated competence with this method. • Do not use a ballpoint or gel pen to label slides, as the ink will spread when the film is fixed. • Correctly made slides leave little blood on the spreader slide, which can be used for making thick and thin slides from the next patient, while another, clean slide from the package is used as a fresh spreader. Do not use a slide as a spreader more than once. 7. RELATED SOPs MM-SOP-01: Cleaning and storing microscope slides MM-SOP-06: Labelling malaria blood films MM-SOP-11: General safety procedures in the malaria microscopy laboratory MM-SOP-13 Management of wastes generated from malaria diagnostic tests 8. REFERENCE WHO. Basic malaria microscopy. Part I. Learner’s guide. Second edition. Geneva: 2010. 9. DOCUMENT HISTORY Date (mmm/yyyy) Version Comments Responsible person (First name, last name) Jan 2016 1 Reviewed and finalized by experts, edited and formatted Glenda Gonzales, Technical Officer, WPRO WHO/HTM/GMP/MM/SOP/2016.05a © World Health Organization 2016. All rights reserved.
الإصدارة 1 - تاريخ بدء النفاذ: 1 كانون الثاني/ يناير 6102 أخذ عينة دم بوخز الإصبع، وإعداد مسحات الدم بنوعيها السميكة والرفيعة الإجراءات التشغيلية المعيارية للفحص المجهري للملاريا - A50-POS-MM الغرض والنطاق. تتناول هــذه الوثيقــة إجــراءات أخذ عينــة دم بوخــز الإصبــع، وإعداد مســحات الــدم بنوعيهــا الســميكة والرفيعــة من أجــل تشــخيص الملاريا عبر الفحــص المجهري البســيط. يحظر إجــراء أي تعديل في هــذه الإجراءات دون موافقة المنســق الوطنــي المعني بضمان جــودة الفحص المجهري لتشــخيص الملاريــا. ينبغي على كل من يجري الفحص المجهري لتشــخيص الملاريا الالتــزام بجميع الإجــراءات المذكورة بهذه الوثيقة، ســواء من العاملــن بالمختبــرات المرجعية الوطنية أو مختبرات المستشــفيات أو مختبــرات الصحة العمومية بالمرافــق الصحية التي تجــري الفحص المجهري لتشــخيص الملاريا. معلومات أساسية. يعتبر فحــص مســحات الدم بواســطة المجهــر من الآليــات الأساســية التــي لا تــزال تشــكل الطريقــة المرجعية لتشــخيص الملاريــا. وأفضــل طريقة متبعــة في تحضيــر مســحات الــدم لتشــخيص الملاريا هــي أخــذ عينــة دم وريدية بوخــز الإصبــع. يلــزم الحصول علــى مســحات دم ســليمة الجودة لضمــان دقــة الفحص. اللوازم والمواد . شــرائح زجاجيــة نظيفــة، 57 x 52 ملليمتــر، بها طرف خشــن (مســنفر) يُخصــص للتوســيم، ويُفضــل أن تكــون حوافهــا مســنفرة أيًضا، وتكــون مــن نــوع جيــد (انظــر 10-POS-MM: تنظيــف الشــرائح المجهريــة وتخزينها)، ٪07 من الكحول الإيثيلي، مسحات كحولية واخزات معقمة، واحدة لكل مريض قطن جاف (كرة قطنية أو قطيلة أو شاش) قفازات لاتكس واقية (خالية من البودرة) حاوية مواد تنطوي على خطــر بيولوجــي أو أي حاوية أدوات حــادة غير قابلة للخــرق (انظــر 31 POS-MM إدارة النفايــات الناتجة عن اختبارات تشــخيص الملاريا) حاوية للنفايات المعدية (انظر 31 POS-MM إدارة النفايات الناتجة عن اختبارات تشخيص الملاريا) صينية أو صندوق يحمل الشرائح وغطاء لتجفيف الشرائح أفقًيا وحمايتها من الأتربة والذباب رف تجفيف استمارات تسجيل (سجل الملاريا) قلم رصاص أو قلم تخطيط مقاوم للمسح احتياطات السلامة. ينبغي عليك ارتداء قفــازات لاتكس واقيــة قبل البــدء في أخذ عينة الــدم، وعند مناولة الشــرائح للحماية الشــخصية، وتجنــب ترك مواد زيتية على الشــريحة مــن شــأنها عرقلة تحضيــر مســحة الــدم، وارتديها أيًضــا عنــد مناولة الــدم، فيمــا عليك نزعهــا قبل تــرك منطقة العمــل أو عند كتابــة الملاحظات. استخدم دائًما واخزة جديدة لكل مريض، ولا تعيد تغطية الواخزات. لا يجوز بتاًتا إعادة استخدام الواخزات. تجنب ملامسة الدم -سواء رطب أو جاف- لأصابعك أو يديك. غط أي جروح أو سحجات بيديك بضماد مضاد للماء. تجنب وخز نفسك عن طريق الخطأ عند مناولة الأدوات الحادة التي لامست الدم. A50-POS-MM: أخذ عينة دم بوخز الإصبع، وإعداد مسحات الدم بنوعيها السميكة والرفيعة 2 اغسل يديك جيًدا بالصابون والماء عند الانتهاء من كل مهمة. إذا لامس الدم بشــرتك، امســحه بســرعة باســتخدام قطيلة قطنية مبللة بالكحول، ثم اغســل المنطقة الملامســة للدم بالمــاء والصابون في أســرع وقت ممكن. عليــك التخلص مــن الأدوات الحــادة مثل الواخــزات والزجــاج المكســور في الحاويــة المخصصة لذلــك؛ حيث يتــم التصرف الآمــن في مثل هذا النوع مــن النفايات إما عــن طريق الحــرق أو محم التعقيــم (الأوتــوكلاف). وفيما يخص المــواد غير الحــادة ولكنها ملوثــة بالدم، يتم التخلص منهــا في حاوية مغطــاة أو كيس الأوتــوكلاف (للتخلص مــن المــواد ذات الخطر البيولوجــي)، حيث يتــم التصرف الآمــن فيها إما عن طريــق الحق أو محــم التعقيــم (الأوتوكلاف). خذ عينة الدم في مكان جيد الإضاءة الإجراءات. توضيحوصف النشاطالرسم التخطيطي 1. وسم الشريحة الزجاجية بتدوين بيانات المريض، وتدوين البيانات بالسجل. 2-3 مرتدًيا قفاز واق نظف الإصبع الوسطى باستخدام إيثانول تركيزه ٪07 أو قطيلة كحولية، واترك الإصبع ليجف في الهواء. 4. اوخز الإصبع باستخدام واخزة (لانست) جديدة معقمة 5-6 اضغط على الإصبع لتظهر القطرة الأولى من الدم، وامسحها باستخدام القطن المجفف 7. اضغط لتظهر قطرة صغيرة من الدم والتقطها بالشريحة، ثم استخدمها لعمل المسحة الرقيقة. ســم الشــريحة الزجاجيــة بتدويــن بيانــات . 1 المريــض علــى الطــرف الخشــن، ودون البيانــات في اســتمارة التســجيل أو ســجل الملاريــا. انظــر الوثيقــة 60 POS توســيم شــرائح دم فحــص الملاريــا. حضر الإصبع الوســطى باليــد غير المهيمنة . 2 (أو إبهــام القــدم الكبيــر بالنســبة للرضــع، ولكن ليس الكعــب)، مرتدًيا القفــاز الواقي. وتجنــب اســتخدام إصبــع الإبهــام باليــد ســواء في حالــة التعامــل مــع الأطفــال أو البالغــن. امســك يــد المريــض بحيــث يكــون الكــف . 3 لأعلــى، ونظــف الإصبــع المعنــي باســتخدام قطعــة قطــن مبللــة بمحلــول إيثانول نســبة تركيــزه ٪07 أو قطيلــة كحوليــة. اضــرب علــى الطــرف المســتدير للإصبــع بضربــات قوية لإزالة أي وســخ أو مــواد زيتية وتحفيز الــدورة الدمويــة. وتأكــد مــن دفء الإصبع، وعليــك إجــراء تدليــك خفيــف إذا تطلــب الأمــر. اتــرك الإصبــع حتــى يجــف الكحــول. باســتخدام واخــزة جديــدة معقمــة، اوخــز . 4 الطــرف المســتدير لإصبــع اليــد أو القــدم بحركــة ســريعة. اضغط علــى الإصبع بخفة، لتظهــر القطرة . 5 الأولى مــن الدم. امســح قطــرة الــدم الأولــى بقطــن جــاف، . 6 وتأكــد مــن إزالــة أي شــعيرات قطنيــة قــد تتبقــى علــى الإصبــع حتــى لا تلتصــق بالــدم. بســرعة امســك شــريحة الــدم مــن حوافها . 7 لتأخــذ عينــة الــدم عبــر الضغــط بخفــة علــى الإصبــع، وملامســة الشــريحة للــدم. خــذ قطــرة صغيــرة مــن الــدم في منتصــف الشــريحة تمثــل مســحة الــدم الرقيقــة. A50-POS-MM: أخذ عينة دم بوخز الإصبع، وإعداد مسحات الدم بنوعيها السميكة والرفيعة 3 توضيحوصف النشاطالرسم التخطيطي 8. احصل على قطرتن أو ثلاث أخرى، واستخدمها في تحضير المسحة السميكة 9. امسح آثار الدم المتبقية على الإصبع 01. ضح الشريحة على سطح مسطح على أن تكون الجهة التي عليها الدم لأعلى 11-31 باستخدام شريحة فارشة، حضر المسحة الرقيقة، عبر دفع قطرة الدم إلى الأمام في حركة سلسة غير منقطعة 41. حضر المسحة السميكة باستخدام زاوية الشريحة الفارشة عن طريق جمع قطرات الدم الثلاث مًعا لتكون دائرة 51. اترك الشريحة لتجف في وضع أفقي، ويجوز استخدام المجفف في حالة الحاجة إلى التجفيف السريع اضغــط بخفــة مــرة أخــرى للحصــول علــى . 8 المزيــد مــن الــدم، وفي هــذه الحالــة خــذ قطرتن أو ثــلاث على بعــد 1 ســنتيمتر من مــكان المســحة الرقيقــة علــى الشــريحة. امســح الدم المتبقي على الإصبع باســتخدم . 9 قطن جــاف ونظيف. لا تتــرك برهــة زمنية بــن التقــاط قطرات . 01 الــدم وفرشــها، وعنــد تحضيــر مســحات الدم، لا بد من وضع الشــريحة على ســطح مســتقيم. لتحضيــر المســحة الرقيقــة، ضــع طــرف . 11 شــريحة «فارشــة» نظيفة بزاويــة 54 درجة أمــام قطــرة الــدم التــي ســتمثل المســحة الرقيقــة. اســحب ببــطء الفارشــة إلــى الــوراء حتــى . 21 تلامــس قطــرة الــدم، وينتشــر الــدم علــى طــول طــرف الفارشــة. حرك الفارشــة إلــى الأمــام بســرعة (بعيًدا . 31 عــن وســط الشــريحة) بحركــة سلســة غير منقطعــة، حتــى تتحــدد نهايــة «ريشــية» للمســحة الرقيقــة بالموزعــة. باســتخدام زاويــة الشــريحة الفارشــة . 41 المســتخدمة في تحضيــر المســحة الرقيقــة، حضــر المســحة الســميكة عــن طريــق تدوير قطــرات الــدم الثــلاث مًعــا لتكــون دائــرة قطرهــا حوالــي 1 ســنتيمتر. لا تــدور الــدم كثيــًرا، فيمكنك تحضيــر مســحة دم دائرية أو مســتطيلة عبــر ثــلاث إلــى ســت دورات ســريعة بزاويــة الشــريحة الفارشــة. بعد تحضير المســحات الرقيقة والســميكة، . 51 اتركهــا لتجــف في الهــواء في وضــع أفقــي علــى صينيــة الشــرائح. وفي حالــة الحاجــة إلــى التجفيــف الســريع، يجــوز تجفيــف المســحات باســتخدام مجفــف الشــعر مــع ضبطــه على درجــة حــرارة منخفضــة ولمدة خمــس ثــوان علــى أن يكــون علــى بعــد 03 ســنتيمتر مــن الشــريحة. لا تضع الشــرائح على مســافة قريبة جًدا من المجفــف تجنًبا لتثبيــت المســحات بالحــرارة. A50-POS-MM: أخذ عينة دم بوخز الإصبع، وإعداد مسحات الدم بنوعيها السميكة والرفيعة 4 ملاحظات . يجب تجفيف المسحة السميكة وهي في وضع سطحي وبعيًدا عن أي أتربة أو ذباب. قد يتم تثبيت المسحة السميكة تلقائًيا في حالة تعرضها لدرجة حرارة عالية، وإذا حدث ذلك، يجب صبغها على الفور. يجوز تجفيف الشــريحة الســميكة عبــر تعرضها برفــق لمجفف الشــعر عند درجــة حــرارة معتدلة (دافئــة) أو أي وســيلة تجفيــف أخرى، ولكن لا بــد من أخذ الحــذر اتقــاًء للتثبيت بالحــرارة، حيــث يمكن أن يحــدث ذلك بســرعة. لا توفر مجفف الشــعر ســوى للفنيــن الذين أثبــوا جدارة في اســتخدام تلــك الطريقة. لا تستخدم القلم الجاف أو الحبر في توسيم الشرائح، حيث سيتمدد الحبر عند تثبيت مسحة الدم. إذا تم تحضير الشــرائح بطريقة ســليمة، ســيكون هنــاك آثار بســيطة للدم علــى الشــريحة الفارشــة، والتي يجــوز اســتخدامها لتحضير مســحات رقيقة وســميكة من عينة دم المريض المقبل، في حن تســتخدم شــريحة جديدة نظيفــة باعتبارها الشــريحة الفارشــة، علًما بأنه لا يجوز تكرار اســتخدام الشــريحة كأداة فارشة. وثائق تتناول إجراءات تشغيل موحدة ذات صلة . 10-POS-MM: تنظيف الشرائح المجهرية وتخزينها 60 POS-MM: توسيم شرائح دم فحص الملاريا 11-POS-MM: إجراءات السلامة العامة في الفحص المجهري المختبري للملاريا 31-POS-MM: إدارة النفايات الناتجة عن اختبارات تشخيص الملاريا مراجع. منظمة الصحة العالمية، أساسيات الفحص المجهري للملاريا، الجزء الأول، الدليل التعليمي، الطبعة الثانية، جنيف، 0102. تاريخ الوثيقة. التاريخ (الشهر/السنة) التعليقاتالإصدار الشخص المسؤول (الاسم الأول، الاسم الأخير) كانون الثاني/ 1يناير 6102 قام الخبراء بمراجعتها وصياغتها في صورتها النهائية، التحرير والصياغة غليندا غونزاليس، الموظف التقني، مكتب منظمة الصحة العالمية الإقليمي لغرب المحيط الهادئ a50.6102/POS/MM/PMG/MTH/OHW © منظمة الصحة العالمية 6102. جميع الحقوق محفوظة.