Contribution du laboratoire ADN au rapport annuel d’activités de l’OMS/OCP 1998

) I CONTRIBUTION DU LABORATOIRE ADN AU RAPPORT ANNU D'ACTIVITES DE L'OMS'OCP ldentification des vecteurs La technique d'identification des vecteurs par hétéroduplex est opérationnelle depuis 1995 et a été utilisée dans la validation par rapport à la cytotaxonomie, des identifications des membres du complexe S. damnosum- Actuellement !a priorité des identifications des vecteurs par hétéroduplex reste accordée aux femelles provenant des zones de transition forêt / savane où les possibilités d'identification morphologique et / ou morphométrique sont limitées du fait de I'hétérogénéité des populations vectrices et du chevauchement des critères utilisés pour certaines différentiations, notamment Ia séparation de S. squamosum des espèces du SouS complexe Sanctipauli et, dans une moindre mesure, des espèces savanicoles. Cette technique connaît un développement avec I'adoption de deux techniques d'extraction de I'AND des simulies et l'utilisation d'une cuve de séquençage pour la séparation des produits. Ces méthodes permettent d'augmenter les nombres d'échantillons identifiés et d'en améliorer la résolution. L'identification des vecteurs s'est enrichie d'une nouvelle technique: les microsatellites. Un transfert de technologie a été fait entre I'ORSTOM / Montpellier et I'OCP. Les membres du laboratoire ont été formés à I'utilisation de cette outil qui permet la caractérisation des populations de S. damnosum s.s. L'OCP dispose pour cela de cinq couples d'amorces. Les microsatellites complèteront les identifications par hétéroduplex. lls serviront dans un premier temps à la caractérisation des simulies migrantes entre le nord de la Sierra Leone et les bassins de Guinée et du Mali. ldentification des parasites L'identification des larves infectantes du parasites en provenance des simulies infectieuses se poursuit au laboratoire de Bouaké depuis six ans. Pour ce faire, le Programme dispose de quatre sondes spécifiques. Deux sont spécifiques d'espèces, I'une d' O. volvulus (sonde OVS-2), I'autre d' O. ochengi (OCH). Les deux autres sondes sont spécifiques de souches, la sondes PFS-1 est spécifique de la souche de forestière du parasite humain tandis que la sonde PSSI -BT est spécifique de la souche savanicole. Comme chaque année, cette technique, alliée à I'identification morphologique des vecteurs, permet de fournir, pour l'évaluation entomologique des traitements larvicides, deux catégories de résultats. Le premier concerne la transmission de l'onchocercose humaine par toutes les t ÿ1 1998 )espèces de Simutium damnosum tandis que Ie second fait état de la transmission de I'onchocercose humaine par les seules simulies de savane. Les identifications des parasites et les résultats épidémiologiques ont fait apparaître que les parasites identifiés comme appartenant à la souche de savane n'entraînait pas de façon systématique les mêmes types de lésion oculaire. Ce constat laisserait supposer qu'il existeraient plusieurs formes dans la souche de parasite de savane. Pour confirmer cette hypothèse sur la pathogénéité des parasites de I'onchocercose des études sont entreprises pour le mise au point de I'outil microsatellite. Deux couples d'amorces sont déjà disponibtes qui permettent d'identifier les espèces et cinq autres couples d'amorces sont en cours d'évaluation. Ces recherches sont faites en collaboration avec I'ORSTOM et l'Université de I'Alabama. La technique visant à déterminer la prévalence de l'infection dans des broyats de simulies est au point. En 1997, le protocole a été finalisé et les responsable de la mise en ceuvre ont été désignés. Des applications possibles de cette méthode ont été décrites, ce sont. l'arrêt définitif des traitements insecticides dans le cadre des études de post traitement, la détection de la recrudescence de l'infection onchocerquienne et le suivi de l'infectivité dans les zones sous distribution ivermectine- Les contrôles de qualité des identifications réalisées au laboratoire de Bouakése poursuivent chaque année par l'envoi d'échantillons codé au laboratoire du Dr, Unnasch. Les vérifications effectuées jusqu'à présent montrent une concordance parfaite entre les identifications faites à Bouaké et aux Etats-Unis. Ces résultats confirment la fiabilité de la technique et la qualité du travail réalisé à Bouaké. Les contrôle de qualité sont également institués pour I'analyse par hétéroduplex de l'ADN. La collaboration entre L'Université de l'Alabama et I'OCP va se poursuivre dans l'année à venir. Sur le plan entomologique, les recherches vont se poursuivre sur l'adaptation de la technique de l'hétéroduplex aux parasites d'onchocerque en vue de déterminer la phylogénie entre souches savanicoles cécitantes et souches forestières moins cécitante. Un autre axe de recherche en cours avec la mème institution est l'exploration de la capacité des microsatellites de servir de marqueurs des différentes souches du parasite et des formes intermédiaires. En 1997, l'importance du polymorphisme des microsatellites a été évalué, une dizaine de loci ont été étudiésdont cinq pourraient servir de marqueurs" Ces travaux ont pour but d'établir une correlation entre les souches du parasite et la pathogénécité et de révéler les nivaux intermédiaires.