Etude multicentrique de la serologie toxoplasmique par differents reactifs ELISA commercialises F. Derouin,1 Y.J.F. Garin,2 C. Buffard,3 F. Berthelot,4 J.C. Petithory,5 et le groupe de travail Toxoplasmose6 du Controle National de Qualite en Parasitologie Une 6tude comparative de 16 trousses ELISA-lgG a et6 r6alis6e a partir de 51 s6rums n6gatifs et positifs titres en unit6s internationales. Pour les s6rums negatifs, des r6actions faussement positives ont 6t6 observ6es avec une trousse. Pour les s6rums positifs, on observe en g6n6ral des titres sup6rieurs en ELISA, comparativement aux titres exprim6s en Ul. Cette tendance est confirm6e par I'analyse de r6gression r6alis6e pour toutes les trousses, dans l'intervalle de titres compris entre 9 et 250 unit6s. Au-delc de 250 Ul, la tres grande variabilit6 observ6e entre les trousses rend toute analyse comparative impossible. Pour chaque trousse, les tendances au sur- ou au sous-titrage mises en 6vidence pour un fabricant donn6 se r6velent dans l'ensemble constantes entre les deux 6tudes. Cette 6tude collaborative a permis, par une m6thode d'analyse simple, de proposer une nouvelle approche de la standardisation des diff6rentes trousses ELISA.
Introduction Les techniques serologiques appliquees au diagnostic de la toxoplasmose doivent permettre en premier lieu de distinguer les individus non infectes, depourvus d'anticorps specifiques, de ceux infectds - meme anciennement - ayant des anticorps circulants a des taux souvent faibles. Cette distinction est essentielle pour de nombreux malades <<a risque>> vis-a-vis de l'infection toxoplasmique (femmes enceintes et malades immunodeprimes principalement). Ces patients sont exposes au risque de primo-infection s'ils sont seronegatifs, ou au contraire au risque de reactivaI Professeur des Universites-Praticien hospitalier. Laboratoire de Parasitologie, H6pital Saint-Louis, 1 Avenue Claude Vellefaux, 75475 Paris Cedex 10, France. Les demandes de tires a part doivent etre adressees a cet auteur. 2 Maitre de Conferences-Praticien hospitalier. Laboratoire de Parasitologie, H6pital Saint Louis, Paris, France. 3 President. Syndicat des Fabricants de R6actifs de Laboratoire, 6 rue de la Tremoille, 75008 Paris, France. 4 Technicienne. Centre Hospitalier de Gonesse, 25 rue Pierre de Theilley, 95500 Gonesse, France. 5 Responsable scientifique du Contr6le National de Qualite en Parasitologie. Centre Hospitalier de Gonesse, 25 rue Pierre de Theilley, 95500 Gonesse, France. 6 Groupe de travail Toxoplasmose, du Controle National de Qualite en Parasitologie: P. Ambroise-Thomas, H. BaufineDucrocq, P. Couzineau, F. Derouin, J.P. Garin, M. Mojon, J.L. Jacquemin, T. Kien, G. Niel, A. Paris-Hamelin, M. PestreAlexandre, J.C. Petithory, J.M. Pinon, J.M. Quilici, R. Robert, J.M. Senet, J.P. Seguela, P. Thulliez, et C. Tourte-Schaffer. Tir6 a part NO 5475
tion d'une infection ancienne s'ils sont seropositifs. Chez ces sujets, la presence ou 1'absence d'anticorps conditionne I'adoption d'eventuelles mesures preventives, hygieno-dietetiques ou chimioprophylactiques (1, 2). I1 est egalement imperatif d'apprecier 1'evolutivite ou I'anciennete de l'infection par la mise en evidence et le titrage des differents isotypes d'anticorps specifiques. Le dosage des IgM et/ou des IgA est un apport important dans les infections relativement recentes, mais le titrage des IgG reste primordial pour caracteriser le stade evolutif, dans la mesure ou cet isotype est produit tout au long de l'infection. De nombreuses techniques ont ete proposees dans ce but, reposant sur des principes immunologiques tres differents, et produisant des resultats exprimes en titre, en dilution ou en densite optique. Des 1968, l'Organisation mondiale de la Sante a propose une standardisation des resultats basee sur la conversion du titre (exprime en dilution pour chaque technique serologique) en unites intemationales (UI) (3). Ce systeme d'unites intemationales a ete mis au point 'a partir des tests de lyse et d'immunofluorescence (IF) impliquant avant tout des antigenes membranaires (4). Par extension, il a ete applique 'a d'autres reactions immunologiques utilisant des antigenes differents, mais la correspondance des titrages obtenus avec les differentes methodes n'est pas toujours respectee, probablement en raison des differences entre les antigenes impliques dans ces reactions (5, 6). Ces discordances sont particulierement observees avec les reactions immunoenzymatiques de type ELISA © Organisation mondiale de la Sante 1994
Bulletin de lOrganisation mondiale de la Sant6, 1994, 72 (2): 249-256
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qui emploient surtout des antigenes solubles d'origine cytoplasmique. Cela a conduit certains fabricants a proposer des unitds propres a leur reactif: unite ELISA, densite optique ou indice. II en resulte une certaine confusion pour les biologistes amenes a effectuer des tests comparatifs sur des serums sequentiels, et pour les medecins prescripteurs, plus habitues a un systeme de quantification homogene entre les laboratoires. En raison de l'importance croissante prise par les reactions ELISA dans la pratique des laboratoires et de la diversite de conception des trousses commercialisees, nous avons effectue une etude comparative entre differentes trousses ELISA dans le but de preciser les relations entre les titres obtenus par ces techniques et celui defini en unites intemationales. Des comparaisons de differentes trousses ELISAIgG ont deja fait l'objet d'evaluations anterieures pour la toxoplasmose (5-7) mais nous avons pu etendre ces etudes grace a une collaboration entre le groupe d'experts du Controle National de Qualite en Parasitologie (CNQP) et le Syndicat des Fabricants de Reactifs de Laboratoire (SFRL), representant un nombre important de fabricants de trousses ELISA.
MWthodes Les fabricants de reactifs de laboratoire suivants ont participe a cette etude: Abbott, Behring, BioMerieux, Biotrol, Boehringer, Clonatec, Diagast, Immunotech, Kone Instruments, Merck Clevenot, Organon Technika, PBS Orgenics, Produits Roche, Sanofi Diagnostics Pasteur, Serono Diagnostic SNC, Syva France SNC. Quatorze fabricants ont participe a la premiere etude (16 trousses), 15 a la deuxieme (16 trousses); 11 ont participe aux deux etudes. Le SFRL a assure la coordination entre les differents participants et le CNQP: il s'est charge de la distribution des serums aupres des fabricants et de la collecte des resultats obtenus. I1 etait demande a chaque fabricant d'effectuer un titrage de chaque serum en unites, et de preciser si le serum devait etre considere comme positif ou negatif, en fonction du seuil de sa technique. Lorsqu'un serum a titre eleve donnait une valeur ELISA sortant de la gamme standard de la trousse, il devait etre repris apres dilution pour obtenir un titrage defini en unites. Traitement des r6sultats. Chaque fabricant a transmis ses resultats au SFRL qui a affecte a chaque trousse ELISA un code permettant de preserver l'anonymat au cours de l'analyse des resultats. Les donnees codees ont ete transmises au CNQP pour analyse. L'ensemble des resultats presentes ci-apres ne mentionne que des donnees codees. Analyse statistique. Une premiere analyse a decrit la distribution des titres en unites, obtenus avec les diffdrentes trousses en fonction du titre defini en UI par le CNQP. Dans une deuxieme analyse, les resultats de chaque trousse ont dte compares aux valeurs moyennes calculees sur l'ensemble des fabricants par une analyse de regression simple. Celle-ci a permis d'estimer pour chaque fabricant les parametres de la droite de regression: y = (m ± SEm).x + (b ± SEb) ou y = mesure observee pour une trousse donnee x = moyenne des mesures observees sur l'ensemble des trousses m pente de la droite; SEm = ecart type de m b = ordonnee a l'origine; SEb = ecart type de b Un intervalle de confiance regroupant 95% des fabricants a ete defini a partir de la moyenne ± 2 ecarts types des valeurs de m et de b des differentes trousses. La signification statistique de la difference par rapport a la moyenne des valeurs de m et de b WHO Bulletin OMS. Vol 72 1994
Materiel et methodes Serums Cinquante et un echantillons constitues de melanges de serums (n = 42) ou de serums individuels (n = 9) ont ete etudies. Tous ont fait l'objet d'un titrage prealable par le groupe d'experts du CNQP. Les titrages ont ete effectues par reaction de lyse, immunofluorescence, agglutination directe (avant et apres 2mercapto-ethanol), agglutination sensibilisee, latex sensibilise, hemagglutination et ELISA. Un titre en unites intemationales (UI/ml) a ete etabli pour chacun des serums etudies a partir des resultats de l'immunofluorescence (4), le seuil de positivite retenu etant de 8 UI/ml (8). Des echantillons de 1 millilitre ont ete conserves lyophilises en flacon et affectes d'un numero de code. Un flacon de chaque echantillon lyophilise a ete adresse a tous les fabricants participant a l'etude. Pour une premiere dtude, 37 echantillons constitues de melanges de serums ont ete envoyes, dont 9 negatifs et 28 positifs, de titre compris entre 9 et 900 UI/ml. Une deuxieme etude comportait 21 echantillons de melanges de serums (2 negatifs et 19 positifs, de titre compris entre 4 et 800 UI/ml) et 9 serums individuels positifs (titre compris entre 16 et 1136 UI/ml). Sept melanges de serums positifs (titre compris entre 9 et 500 UI/ml) ont ete envoyes dans les deux etudes, affectes de numeros de code differents. 250
S6rologie toxoplasmique par diff6rents ELISA commercialis6s
estimees pour un fabricant donne a ete calculee par le test t.
Fig. 1-3. R6partition des titres obtenus en ELISA en fonction du titre d6fini en unit6s internationales pour les diff6rentes trousses.
Resultats Les deux etudes serologiques ont ete realisees de fa,on sequentielle entre octobre 1990 et juin 1992. Elles ont fait l'objet d'une analyse individuelle et descriptive permettant de determiner la valeur seuil entre les serums negatifs et positifs pour chaque trousse, et d'une analyse de regression destinee a evaluer la dispersion des resultats entre les differents reactifs, pour l'ensemble des serums positifs.
Premiere etude s6rologique S6rums n6gatifs (n = 9). Les resultats des ELISA sont compris entre 0 et 31 unites suivant les trousses. Avec l'une d'entre elles, tous les serums negatifs sont constamment trouves superieurs a 20 unites; avec toutes les autres, les serums sont trouves entierement negatifs (0 unite), ou ayant un nombre d'unites infdrieur au seuil de positivite indique par le fabricant.
Serums positifs (n = 28). L'analyse descriptive generale de l'ensemble des serums montre une assez bonne homogeneite des resultats entre 9 et 200 UT mais une grande dispersion des rdsultats suivant les trousses pour des titres plus eleves. Entre 9 et 20 UT (8 serums) tous les serums ont ete trouves positifs avec les differentes trousses; dans deux cas le resultat etait considere comme <<douteux>>, proche de la valeur seuil de la trousse. La moyenne generale des resultats en ELISA est de 29,3 ± 16,8 unites, pour une valeur moyenne de 13,7 ± 3,1 UT en immunofluorescence. L'ensemble des resultats apparait assez homogene pour les differentes trousses, 'a l'exception d'une seule, dont les resultats sont compris entre 41 et 158 unites (Fig. 1). Entre 20 et 50 UT (10 serums), tous les resultats ont ete trouves positifs. Comme dans le groupe precedent, les titres obtenus en ELISA (moyenne = 77,7 ± 32,2 unites) sont generalement plus eleves que ceux definis en Ul (moyenne = 35,4 + 5,9 UI) (Fig. 2). Deux trousses obtiennent cependant des valeurs tres nettement ecartees de 1'ensemble des autres. Entre 50 et 200 UT (6 serums), on note egalement un surtitrage par la methode ELISA (moyenne = 211,8 + 47 unites) par rapport au titrage en UT (moyenne = 122,2 ± 53,6 UI). Des valeurs tres superieures sont obtenues avec deux trousses (moyenne = 682,5 unites et 568,2 unitds) (Fig. 3). Au-dela de 200 unites (4 serums), il existe une dispersion extremement importante des resultats ne WHO Bulletin OMS. Vol 72 1994
--Trousses ELISA Moyenne des velours des diff6rentes trousses ELISA 251
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permettant aucune analyse (Fig. 3). On note en particulier une discordance importante entre les resultats obtenus en ELISA et ceux exprimes en UIl pour un serum titrant 800 UI et contenant des IgM a titre eleve. Une seconde analyse a ete realisee apres extraction des valeurs donnees par deux trousses dont les resultats sont faussement positifs ou anormalement surtitres par rapport aux autres. Pour les titres compris entre 9 et 200 UT, on observe alors une meilleure homogeneitd des reponses avec les differentes trousses ELISA, mais l'ensemble apparaet globalement surtitre comparativement aux valeurs en Ul. Le rapport entre la valeur moyenne des titres en unites ELISA et la valeur moyenne en UI est de 1,5 (compris entre 1,4 et 1,87 suivant les classes de positivite). L'application de ce facteur permet de <<corriger>> en partie le surtitrage pour tous les serums positifs, sans affecter la sensibilite pour les titres faibles. L'analyse de regression permet cependant de mieux preciser les caracteristiques de chaque trousse sur l'ensemble des serums positifs de titre <250 unites. Le tableau 1 presente les resultats individuels pour tous les fabricants, avec mention des ecarts types de la pente m et de l'ordonnee b; l'ensemble des droites est presente figure 4. Pour certaines trousses, les pentes obtenues sont significativement inferieures (m-) ou significativement superieures (m+) a la moyenne des fabricants. L'ecart type de
cette pente permet d'estimer la dispersion des resultats sur la gamme des serums etudies. Le facteur b represente l'ordonnee a l'origine. Pour les faibles titres, sa valeur permet d'estimer le risque potentiel de sous-titrage lorsqu'elle est significativement plus faible par rapport a la moyenne du fabricant (b-) ou de surtitrage lorsqu'elle est plus elevee (b+). I1 apparalt que deux fabricants ont une valeur de b trop faible, et que l'un a une valeur de b significativement plus elevee. L'analyse de la droite de regression des resultats definis en UI/ml par le CNQP montre que pour les valeurs de m comme pour celles de b, il n'y a pas de diffdrence significative par rapport aux ELISA, bien que la valeur de la pente m soit plus basse (reflet du <surtitrage> des ELISA par rapport aux UI).
Deuxieme 6tude serologique S6rums n6gatifs (n = 2). Ces deux serums entierement negatifs ont ete trouves negatifs avec les 16 trousses etudies. S6rums positifs (n = 28). Des serums a titre faible ont donne des resultats variables suivant les reactifs. Un serum titrant 16 UT a ete trouve positif avec 15 trousses et douteux avec une trousse. Un serum titrant 4 UT (considere comme <<douteux>>) a ete trouve negatif avec 8 trousses; un serum titrant 9 UI a ete trouve negatif avec 4 trousses.
Tableau 1: Premlire 6tude s6rologique: m6langes de s6rums de titre compris entre 9 et 250 unit6s/ml (20 s6rums). Param6tres des droites de r6gression y = mx + b. Pour chaque trousse, les valeurs de la pente m et de l'ordonn6e A l'origine b sont compar6es aux valeurs moyennes obtenues avec 1'ensemble des trousses. Les valeurs significativement sup6rieures c la moyenne sont indiqu6es m+ ou b+. Les valeurs significativement plus faibles sont indiqu6es m- et b-. CNQP: Contr6le National de Qualite en Parasitologie (droite 6tablie A partir des valeurs en unit6s internationales d6termindes par immunofluorescence). NS: non significatif. m
Trousses ELISA B3T1 B3T2
C1o E13 F12 G2 H8 J4 K7 L5 M14 N6
PIMi PIM2 Droite CNQP
Valeur 1,2 1,2 0,8 1,1 0,7 0,5 1,1 0,9 0,8 1,3 1,2 1,1 0,7 1,3 0,8
Ecart type 0,52 0,41 0,06 0,85 0,25 0,24 0,09 0,10 0,06 0,05 0,07 0,05 0,08 0,45 0,10
NS NS NS NS mm-
NS NS NS m
NS NS mm
NS
Valeur - 2,9 -16,0 +10,2 + 2,6 + 2,0 - 3,5 + 4,6 + 6,4 +24,8 + 3,0 -20,8 +11,4 - 7,1 -14,9 - 6,9
b Ecart type 4,7 3,8 5,8 7,7 2,2 2,2 8,2 6,4 5,4 4,7 6,2 4,7 7,1 4,2 9,2
NS bNS NS NS NS NS NS b NS b NS NS NS NS
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S6rologle toxoplasmique par diff6rents ELISA commercialls6s
Pour les autres s6rums positifs >9 UI, les traitements statistiques utilises dans la premiere etude ont ete appliqu6s en diff6renciant les m6langes de serums des s6rums individuels. L'analyse descriptive a montre une bonne homogeneite des resultats entre les differents participants et toutes les donnees ont ete prises en compte. Tout comme pour la premiere etude s6rologique, une dispersion importante est observ6e pour les titres superieurs a 200 UI, aussi bien pour les melanges de serums que pour les serums individuels. L'analyse par regression a ete effectuee pour les serums individuels et pour les m6langes de serums positifs ayant des titres <240 unites (Tableau 2, Fig. 5 et 6). Malgr6 quelques diff6rences, des resultats assez comparables sont obtenus sur les melanges de serums et les serums individuels montrant que dans cette gamme de titres, cette analyse peut etre r6alisee indifferemment sur les deux types d'echantillons. On note cependant que les valeurs des ecarts types de b sont plus 6levees que dans la premiere etude, probablement en raison du nombre plus limite de serums etudi6s (7 serums individuels compris entre 30 et 240 unites et 17 melanges de serums compris entre 30 et 240 unites). Pour la plupart des fabricants ayant participe aux deux etudes, la correspondance entre les r6sultats est bonne, a l'exception peut etre d'un fabricant (C10) pour lequel les valeurs apparaissent plus nettement surtitrees dans la deuxieme etude que dans la premiere. La comparaison des valeurs obtenues pour les s6rums envoyes dans les deux etudes montre une bonne reproductibilite (Tableau 3); cette analyse est cependant limit6e par le petit nombre de serums etudies et le faible nombre de repetitions.
Fig. 4-6. Droltes de r6gresslon pour chaque trousse ELISA. (Abscisse: valeur moyenne des ELISA; ordonnoe: valeur individuelle pour chaque trousse. L'aire gris4e est d6finie par les valeurs extremes de la moyenne de m et de b, calcul6es avec un intervalle de confiance A 95%.)
i
19
jIO
3i
Discussion La collaboration qui a pu etre etablie entre le groupe de travail toxoplasmose du Controle National de Qualite en Parasitologie et le Syndicat des Fabricants de Reactifs de Laboratoire a permis de realiser une etude comparative portant sur un grand nombre de trousses ELISA, avec une batterie importante de s6rums positifs et negatifs. L'analyse descriptive des resultats obtenus a permis de preciser la valeur seuil (positive/negative) pour les differentes trousses et la reproductibilite des resultats. L'analyse par regression a defini des parametres propres a chaque trousse permettant d'effectuer une comparaison plus rigoureuse entre les diff6rents ELISA, en mesurant la dispersion des resultats concemant les serums positifs par rapport a une droite resumant l'ensemble des valeurs obtenues avec toutes les trousses ELISA. Les serums negatifs sont trouves depourvus d'anticorps ou contenant des titres non significatifs WHO Bulletin OMS. Vol 72 1994
Valour mayenne des ELISA (Unitis) -
Troussos EUSA Contrl de Quultd on Paaolobo 253
F. Derouln et al. Tableau 2a: DeuxIbme 6tude s6rologlque: m6langes de s6rums de titre compris entre 12 et 240 unit6s/ml (17 s6rums). Parambtres des droites de r6gression y = mx + b. Pour chaque trousse, les valeurs de la pente m et de l'ordonn6e A l'origine b sont compar6es aux valeurs moyennes obtenues avec 1'ensemble des trousses. Les valeurs significativement sup6rieures a la moyenne sont indiqu6es m+ ou b+. Les valeurs significativement plus faibles sont indiqu6es m- et b-. CNQP: Contr6le National de QualitM en Parasitologie (droite 6tablie a partir des valeurs en unites internationales d6termin6es par immunofluorescence). NS: non significatif. m b Trousses ELISA Valeur Ecart type Valeur Ecart type B3 1,1 0,05 NS + 3,2 5,9 NS C10 M-41,2 2,5 0,29 NS 33,6 E13 + 3,1 1,0 0,11 NS 12,3 NS F12 0,7 0,05 NS - 3,1 6,1 NS G2A NS 0,6 0,05 NS -15,4 5,6 G2B m- 5,9 0,6 0,05 NS 6,2 H8 1,4 0,14 NS +29,9 NS 16,7 K7 NS - 9,0 NS 5,4 0,9 0,04 L5 1,2 0,08 NS +31,0 b 9,7 M14 0,9 0,07 NS - 5,5 8,2 NS N6 1,7 0,20 m -34,9 22,6 NS 034 NS 0,6 0,09 +54,5 10,1 b P1 0,6 0,13 NS -13,6 NS 15,1 R17 0,7 0,08 NS + 2,5 NS 9,7 S21 0,8 0,12 NS + 1,0 NS 14,2 + 2,2 V15 0,7 0,06 NS NS 7,3 Droite CNQP 0,6 0,15 NS - 4,2 NS 16,0 Tableau 2b: Deuxibme etude s6rologique: s6rums Individuels de titre compris entre 30 et 240
unit6s/mi (7 s6rums). Trousses ELISA
Valeur 1,1 2,0 0,8 0,8 0,8 0,8 1,1 0,9 1,1 0,9 1,9 0,5 0,9 0,7 1,0 0,5 1,2
m Ecart type 0,01 0,73 0,24 0,12 0,15 0,12 0,25 0,14 0,12 0,18 0,18 0,05 0,41 0,30 0,11 0,04 0,57
Valeur
b Ecart type 2,5 119,5 39,6 19,6 25,6 19,7 40,7 22,9 20,7 30,3 30,6 9,5 66,7 50,1 19,4 6,8 92,5
B3
C10 E13 F12 G2A G2B H8 K7 L5 M14 N6 034 P1 R17 S21 V15 Droite CNQP
NS NS NS NS NS NS NS NS NS NS m+ m-
- 8,7
-14,7 + 4,5 - 4,2 -18,8 -17,7 +46,2 - 8,5 +19,8 - 8,8
-40,5 +68,5 -29,4 + 4,9 - 1,6 + 9,1 -26,7
NS NS NS m-
NS
NS NS NS NS NS NS NS NS NS NS NS b NS NS NS NS NS
pour 15 des 16 trousses dans la premiere etude: les resultats sont dits <<negatif>> (O unite) ou <<inferieur a>> un seuil defini pour chaque trousse. Ce demier mode d'expression d'un resultat negatif nous semble preter a confusion car un serum trouve <12 unites et considere comme negatif par un fabricant dont le seuil est 'a 12 unites, peut etre abusivement considere comme positif avec d'autres techniques dont le seuil est plus 254
bas. Pour eviter toute erreur d'interpretation, il serait indispensable de mentionner tres clairement le seuil de positivite dans l'expression des resultats ou d'adopter un seuil de positivite commun 'a toutes les trousses ELISA. Pour les serums positifs, les resultats des deux etudes montrent une bonne homogeneite des valeurs obtenues avec diff6rentes trousses ELISA-IgG pour WHO Bulletin OMS. Vol 72 1994
Sdrologle toxoplasmlque par diffdrents ELISA commerclalls6s Tableau 3: Comparalson des valeurs obtenues en ELISA (unit6s/ml) pour 7 s6rums examin6s dans les 2 6tudes s6rologlques Titres (unit6s) 2e etude 1re etude NO des serums Moyenne Ecart type Moyenne Ecart type 17 9 16 9 E15 121 81 64 104 5281 105 129 97 103 4281 102 93 154 160 E8 217 61 154 E14 220 1177 613 1161 E7 760 728 El 1416. 854 1626
des titres d'anticorps <200 UI/ml, mais il apparait clairement que la plupart des ELISA donnent des titres plus eleves que ceux etablis en UI par immunofluorescence. Ce surtitrage, observe dans les deux etudes, est a peu pres constant pour tous les serums testes, et l'introduction d'un facteur de correction peut representer une solution simple pour comparer les resultats obtenus par immunofluorescence et par ELISA. Globalement, cette bonne homogeneite des differents ELISA entre eux et cette bonne correspondance (a un facteur de correction pres) avec les tests utilisant des antigenes membranaires, semblent tout a fait favorables 'a l'utilisation ou a l'adoption d'unites communes aux differentes trousses ELISA. La nature des complexes antigeniques utilises dans les ELISA se presentait a priori comme la difficulte majeure d'une telle conversion, dans la mesure oCu ils impliquaient essentiellement des extraits cytoplasmiques alors que l'immunofluorescence ou le test de lyse reve'lent des anticorps avant tout dirig6s contre la membrane du parasite. L'evolution des preparations antigeniques, qui maintenant incluent une plus grande part d'antigCenes membranaires, explique probablement la bonne concordance que nous observons. Pour les titres eleves, la discordance avec les UI et la dispersion des resultats des ELISA restent importantes, et peuvent etre liees a trois facteurs complementaires: a) la presence d'IgM non dosees par les ELISA specifiques des IgG, mais qui sont prises en compte dans le titrage en Ul par le test de lyse ou l'immunofluorescence utilisant un conjugue anti-immunoglobulines totales. II est a noter que l'etalon intemational actuel contient egalement des IgM specifiques. b) la specificite des anticorps produits lors des stades precoces de l'infection (9). Dans ce cas, la sensibilite individuelle de telle ou telle trousse peut etre differente en fonction de la nature de 1'antigCene utilise pour la sensibilisation du support. WHO Bulletin OMS. Vol 72 1994
c) l'affinit6 des anticorps, qui joue un role majeur dans les reactions de type ELISA et differe sensiblement en fonction du stade de la maladie (10). Ces parametres n'ont pu etre que tres partiellement analyses dans le cadre de la deuxieme dtude, en utilisant des serums 'a titre eleve provenant de melanges de serums ou de serums individuels. Bien qu'aucune difference significative n'ait pu etre mise en 6vidence entre les resultats obtenus avec les melanges et avec les serums individuels, il serait souhaitable d'envisager de completer cette etude avec des serums d'infection tres r6cente, ce qui permettrait de s6lectionner des trousses aptes a la detection d'anticorps precoces. Enfin, la repetition de plusieurs echantillons dans les deux etudes semble montrer une bonne reproductibilite sur une gamme de titres relativement large; ce fait, tres important, pour la <<confiance> que l'on peut accorder aux reactifs ELISA doit etre confirme et approfondi par des tests repetes. L'etablissement par le CNQP d'une batterie d'etalonnage commune incluant des serums de titre compris entre 0 et 300 UT d'IgG specifiques est envisage. La poursuite de ce travail suppose une collaboration constante entre le SFRL et le CNQP pour envisager dans les annees a venir un test annuel sur un melange de serums, et l'analyse des resultats obtenus suivant des modalites comparables a celles que nous avons definies dans cette etude. Une telle approche nous semble benefique pour les fabricants qui peuvent ainsi suivre l'evolution de leurs reactifs et pour les utilisateurs qui pourront trouver dans ces analyses repetees un controle de qualite indispensable a la securite de la pratique de la biologie medicale. Enfin, l'approche methodologique mise au point dans cette etude pourrait etre etendue a d'autres pays pratiquant un controle de qualite de la serologie toxoplasmique, notamment dans le cadre de la constitution d'un reseau europeen de recherche et de prevention concemant la toxoplasmose congenitale et la toxoplasmose au cours du SIDA.
Summary Multicentre study on serological testing for toxoplasmosis using various commercial ELISA reagents A collaborative study conducted by the French National Agency for Quality Control in Parasitology (CNQP) and various manufacturers of ELISA kits, represented by the Association of Laboratory Reagent Manufacturers (SFRL) compared the toxoplasmosis IgG antibody titres obtained with 255
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different ELISA-lgG kits and determined the relationships between the titres obtained by these techniques and the titre defined in international units (IU). Fifty-one serum samples with toxoplasmosis antibody titres ranging from 0 to 900 IU were tested in two successive studies with 16 ELISA-lgG kits. For the negative sera, false-positive reactions were observed with one kit. For the positive sera, the titres observed in ELISA were generally higher than those expressed in IU. Above 250 IU, the very wide variability of the titres found with the different ELISA kits renders any comparative analysis impossible. For titres below 250 IU, the results are sufficiently homogeneous to permit the use of regression analysis to study how the results for each ELISA kit compare with the mean results for the other kits. The slope of the line of regression shows a tendency to overtitration or under-titration compared with the results of the other manufacturers; the ordinate at the origin reflects the positivity threshold of the reaction and can be used to assess the risk of a lack of sensitivity (high threshold) or of specificity (threshold too low). On the whole, the trends revealed for a given manufacturer are constant from one study to the other. Within this range of titres, regression analysis also reveals the general tendency of ELISA kits to overestimate the titres by comparison with immunofluorescence. This collaborative study, using a set of selected sera and a simple method of analysis, made it possible to propose a new approach to standardizing the various ELISA kits.
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WHO Bulletin OMS. Vol 72 1994