Руководство по технике биологической безопасности для диагностических и научно-исследовательских лабораторий, работающих с вирусом иммунодефицита человека

воз Серия «СПИД» 9

Руководство по технике биологической безопасности для диагностических и научно-исследовательских лабораторий, работающих с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) В ы п у щ е н о издательством "Медицина" по поручению Министерства здравоохранения Российской Ф е д е р а ц и и , которому В О З вверила выпуск данного издания на русском языке

ВСЕМИРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ЖЕНЕВА 1993

Д л я каталога публикаций В О З Руководство п о технике биологической безопасности для диагностических и научно-исследовательских лабораторий, р а б о т а ю щ и х с вирусом и м м у н о д е ф и ц и т а человека. ( В О З , С е р и я " С П И Д " 9) 1. Предупреждение несчастных случаев. 2. Сдерживание распространения биологически опасных веществ. 3. В И Ч . 4. В И Ч - и н ф е к ц и и — предупреждение и борьба. 5. Лаборатории — стандартные. С е р и я 1. 18ВК 92 4 121009 5 1011-5773 ( К Ш Классификация: 23)

I 5 В N 5-225-01935-8 I 8 В N 92 4 121009 5

© \Уог1<1 НеаНН ОгеаШгайоп 1991 © В с е м и р н а я организация здравоохранения, 1993 Н а публикации Всемирной организации здравоохранения распространяются п о ­ л о ж е н и я протокола № 2 Всемирной конвенции об охране авторских прав. Заявление о р а з р е ш е н и и н а перепечатку и л и перевод публикаций В О З частично и л и !п (о(о следует направлять в отдел публикаций Всемирной организации здравоохранения, Ж е н е в а , Ш в е й ц а р и я . В с е м и р н а я организация здравоохранения охотно удовлетворяет т а к и е просьбы. Обозначения, используемые в настоящем издании, и приводимые в нем м а т е р и ­ а л ы н и в коем случае не в ы р а ж а ю т мнение Секретариата Всемирной организации здравоохранения о юридическом статусе какой-либо страны, территории, города и л и р а й о н а , и х правительствах и л и их государственных границах. Упоминание некоторых к о м п а н и й или продукции отдельных изготовителей н е означает, что В с е м и р н а я организация здравоохранения отдает и м предпочтение п о сравнению с другими, не упомянутыми в тексте, или рекомендует их к использова­ н и ю . К а к п р а в и л о , патентованные наименования выделяются начальными пропис­ ными б у к в а м и . 4105050000-76 039(01)-93

СОДЕРЖАНИЕ Благодарность 1. В в е д е н и е 2. С т а в д а р т н ы е инструкции п о т е х н и к е б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с т и Меры предосторожности, которые д о л ж н ы соблюдать лабораторные работники , Вытекание жидкостей и лабораторные а в а р и и Обработка и удаление контаминированного м а т е р и а л а и отходов Медицинское обследование лабораторных работников 3. Д о п о л н и т е л ь н ы е и н с т р у к ц и и д л я с е р о л о г и ч е с к и х л а б о р а т о р и й Лабораторные помещения и оборудование 4. И н с т р у к ц и и д л я л а б о р а т о р и й , в к о т о р ы х п р о и з в о д и т с я в ы д е л е н и е в и р у с а Лабораторные помещения и оборудование Меры предосторожности при работе Медицинское обследование сотрудников 5. И н с т р у к ц и и д л я н а у ч н о - и с с л е д о в а т е л ь с к и х и п р о и з в о д с т в е н н ы х даборато |Н1й Лабораторные помещения и оборудование Меры предосторожности при работе Лабораторные а в а р и и , с о п р о в о ж д а ю щ и е с я выделением а э р о з о л е й Медицинское обследование сотрудников Транспортировка проб — о б щ и е у к а з а н и я П е р е в о з к а проб общественным транспортом 7. И н с т р у к ц и и п о с б о р у п р о б к р о в и 4 5 8 8 9 10 12 14 14 16 16 17 17 18 18 19 20 20 21 22 26

6. И н с т р у к ц и и п о м е р а м з а щ и т ы при о б р а б о т к е и т р а н с п о р т и р о в к е п р о б . . . 21

Избранная дополнительная литература 27 П р и л о ж е н и е 1. П р о ц е д у р ы , с в я з а н н ы е с п о т е н ц и а л ь н ы м р и с к о м э к с п о з и ц и и к ВИЧ 28 П р и л о ж е н и е 2. В ы б о р п е р ч а т о к и о б р а щ е н и е с ними П р и л о ж е н и е 3. С т е р и л и з а ц и я и д е з и н ф е к ц и я П р и л о ж е н и е 4. Обработка п о в т о р н о и с п о л ь з у е м ы х и г л и ш п р и ц е в 29 32 38

П р и л о ж е н и е 5. Б о к с ы для б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с т и и д р у г о е и з о л и р у ю щ е е оборудование 40

Благодарность Настоящие инструкции разработаны персоналом Глобаль­ ной программы ВОЗ по СПИДу и Службами микробиологи­ ческих и иммунологических исследований ВОЗ. Они утверж­ дены руководителями Сотрудничающих центров ВОЗ по био­ логической безопасности и Консультативной группой для двух программ. Особая благодарность выражается следз^щим специали­ стам, представившим ценные научные и технические рекомен­ дации в процессе подготовки инструкций: — Д-р С.Й.СоИшя, ТЬе АзЬез, Хэдлоу, Кент, Англия; — Г-жа М.Е.Кеппеду, руководитель, Сотрудничающий центр ВОЗ по технике биологической безопасности и консульта­ тивным службам. Отдел биологической безопасности. Центр по борьбе с болезнями, Типпеу'8 РазШге, Оттава, Онтарио, Канада; — Г-н У.К.0у1а11, Отдел биологической безопасности и защиты внешней среды, РИГоиг СазЙе, С1еп$саг8е, Перт, Шотлан­ дия; — Д-р О. уап йе Огоеп, Институт тропической медицины им. Принца Леопольда, Антверпен, Бельгия.

4

1. Введение Данное руководство по технике биологической безопасносга предназначено для защиты сотрудников диагностических и научно-исследователы;ких лабораторий, работающих с виру­ сом иммунодефицита человека (ВИЧ) или с материалами, содержащими этот возбудитель. Руководство пригодно т а к ж е для лабораторий, занимающихся другими агентами, передаю­ щимися с кровью, такими как вирус гепатита В ( В Г В ) . Пуб­ ликуемые материалы применимы как в развитых, так и в развивающихся странах мира, однако в данном случае особое внимание уделяется рекомендациям, предназначенным для ла­ бораторного персонапа развивающихся стран. Опасность лабораторного заражения В И Ч или В Г В связана главным образом с контаминацией рук и слизистых оболочек глаз, носа и ротовой полости инфицированной кровью или другими биологическими жидкостями. Данные о передаче В И Ч или В Г В воздушно-капельным путем в настоящее время от­ сутствуют. Результаты текущих исследований свидетельствуют о низ­ кой частоте заражения лабораторных работников ВИЧ-инфек­ цией. Считается, что опасность такого заражения при уколах кожи иглой, контаминированной кровью, инфицированной В И Ч , составляет от 0,13 до 0,5 % . В отличие от этого, риск заражения В Г В после такой ж е экспозиции к соответствую­ щему агенту превышает указанный выше показатель в 45—120 раз. Хотя степень риска профессионального инфицирования В И Ч невелика, последствия такого заражения чрезвычайно тяжелы; они не должны недооцениваться лабораторным пер­ соналом. Ввиду отсутствия вакцины в настоящее время един­ ственным способом защиты от профессионального заражения В И Ч является соблюдение безопасного режима работы. С у м ­ марные данные о лабораторных процедурах, связанных с опас­ ностью заражения ВИЧ-инфекцией, о сотрудниках, подверга­ ющихся этому риску, и о механизмах передачи В И Ч пред­ ставлены в приложении 1. Подготовка лабораторного персонала по технике биологи­ ческой безопасности имеет жизненно важное значение. Не­ прерывное обучение по вопросам соблюдения мер безопасности 5

Техника биологической безопасности для лабораторий, работающих с В И Ч

непосредственно на рабочем месте играет большую роль для всех категорий лабораторного и вспомогательного персонала. Недостаточное соблюдение этих мер на практике и ошибки отдельных сотрудников могут свести на нет действие стандар­ тных правил безопасности и сделать лабораторное оборудова­ ние источником опасности. Руководители лабораторных служб должны быть уверены в том, что их сотрудники осознают биологическую опасность и в достаточной мере подготовлены в этой области. Следует непрерывно контролировать соблюдение инструкций по без­ опасности в ходе практической работы. Необходимо подчер­ кивать, что ответственность з а соблюдение правил биологиче­ ской безопасности возлагается на каждого отдельного сотруд­ ника. Работники лабораторий должны всегда сообщать своим руководителям обо всех действиях и условиях, связанных с опасностью заражения ВИЧ-инфекцией. Приводимые в настоящей публикации инструкции предус­ матривают следующие основные меры зашиты: • Профилактику колотых ран, порезов и ссадин; защиту име­ ющихся ран, кожных поражений, конъюнктив и поверхно­ стей слизистых оболочек. Соблюдение простых защитных мер, направленных на пре­ дупреждение контаминации сотрудника и его (ее) одежды; выполнение основных гигиенических правил (включая ре­ гулярное мытье р у к ) . Борьбу с загрязнением поверхностей лабораторного обору­ дования путем осторожного обращения с ним и с помощью дезинфекции. Безопасное удаление контаминированных отходов.

•

•

•

В данной публикации содержатся следующие виды инст­ рукций по основным мерам биологической защиты: • Стандартные инструкции по мерам биологической защиты для всех лабораторных процедур и видов лабораторной ра­ боты. Дополнительные инструкции для: —серологических лабораторий; —лабораторий, в которых производится выделение вируса; —научно-исследовательских и производственных лаборато­ рий. 6

•

1. В в е д е в и е

• •

Инструкции по мерам з а щ и т ы при обработке, переносе и транспортировке проб для исследования. Инструкции по сбору проб крови.

Должен быть составлен и распространен среди всех сотруд­ ников письменный план срочного осуществления защитных мер при всех авариях и попадании заразных материалов в лабораторию. Как было указано выще, данные инструкции предназначены прежде всего для лабораторий, работающих с В И Ч . В другой публикации В О З * приведены более обширные инструкции по соблюдению правил техники биологической безопасности при работе со всеми заразными микроорганизмами. Эти инструк­ ции пригодны для лабораторий, занимающихся различными видами микробиологической диагностической и научно-иссле­ довательской работы.

* ЬаЬогаииу 1983.

Ыо$а/е1у тапиа1,

Ж е н е в а , В с е м и р н а я организация здравоохранения, 7

2. Стандартные инструкции по технике биологической безопасности Основной опасностью для лабораторных работников явля­ ется загрязнение рук, а также слизистых оболочек глаз, носа и рта инфицированной кровью и другими биологическш!&1 жидкостями организма. Такая контаминация обычно происхо­ дит при проникающих повреждениях кожи острыми предме­ тами, а также при попадании на кожу и слизистые оболочки заразных материалов (при повреждении целостности лабора­ торной посуды, расплескивании жидкости и т.п.). В настоящих инструкциях описаны практические приемы и процедуры, на­ правленные на то, чтобы свести вероятность таких лаборатор­ ных аварий до минимума.

Меры предосторожности, которые должны соблюдать лабораторные работники 1. Надевайте перчатки при работе с заразными материалами, а также в тех случаях, когда есть вероятность контакта с кровью и другими биологическими жидкостями. Все лабо­ ратории, в которых проводится работа с материалами, по­ тенциально зараженными ВИЧ, должны быть снабжены достаточным количеством высококачественных перчаток (см. приложение 2). 2. Если Вы предполагаете, что Ваши перчатки загрязнены заразным материалом, выбросьте их, вымойте руки и на­ деньте норые перчатки. 3. Не прикасайтесь к глазам, носу или к другим участкам кожи и слизистых оболочек руками в перчатках. 4. Не покидайте рабочее место и не ходите по лаборатории в перчатках. 5-'Мойте руки водой и с мыЯом сразу же после их загрязнения и после окончания работы. Если Вы носите перчатки, то вымойте руки водой с мылом после того, как снимете пер­ чатки (см. также приложение 2). 8

2. С т а ц д а р г а ы е и н с т р у к ц и и п о т е х н и к е б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с т и

6. Надевайте лабораторный х а л а т или специальную защитную одежду, когда Вы работаете в лаборатории. Пользуйтесь предпочтительно халатами "обертывающего типа". Снимай­ те защитную одежду, когда уходите из лаборатории. 7. При работе с материалом, потенциально инфицированным В И Ч , закрывайте дверь и ограничьте вход в лабораторию. Н а дверях должна быть табличка "Биологическая опасность. Вход воспрещен". 8. Лабораторное помещение должно содержаться в чистоте и порядке, т а м не должно быть лишних предметов и обору­ дования. 9. По окончаний работы и в конце каждого рабочего дня проводите дезинфекцию лабораторного оборудования. Э ф ­ фективным универсальным дезинфектантом является рас­ твор гипохлорита с концентрацией активного хлора 0,1 % (1 г / л , 1000 ч/млн) (приложение 3). 10. По возможности откажитесь от использования игл и других острых инструментов. Использованные иглы, шприцы и другие острые инструменты и предметы помещайте в кон­ тейнеры, устойчивые к уколам. Н е насаживайте повторно на шприцы уже использованные иглы и не снимайте иглы со шприцев. И . Никогда не насасывайте жидкость ртом через пипетку. 12. Выполняйте все технические процедуры таким способом, который сводит к минимуму опасность образования аэро­ золей, мелких капель и выплескивания или выливания жидкости. 13. Не принимайте пищу, не пейте, не курите, не пользуйтесь косметическими средствами и не храните продукты и лич­ ные вещи в лаборатории. 14. Убедитесь в том, что в лаборатории есть эффективный план борьбы с насекомыми и грызунами (это стандартная рекомендация по технике биологической безопасности).

Вытекание жидкостей и лабораторные аварии 1. При вытекании инфицированных или потенциально инфи­ цированных жидких материалов следует прежде всего на­ крыть их бумажными салфетками или другим гигроскопич­ ным материалом. Дезинфектант следует наливать на всей 9

Техника биологической безопасности для лабораторий, работающих с В И Ч

площади, где скопилась излившаяся жидкость, и на абсор­ бирующий материал, оставив на 10 минут. Стандартным дезинфектантом, рекомендуемым для очистки загрязнен­ ных поверхностей*, является раствор гапохлорита с кон­ центрацией активного хлора 0,5 % (5 г / л , 500 ч / м л н ) . Однако для лабораторий, в которых проводится работа с культурами В И Ч и вирусными препаратами, рекомендуется более высокая концентрация активного хлора (1,0 % ) . Смесь дезинфектанта и излившегося (расколотого) матери­ а л а следует удалять абсорбирующими салфетками, которые з а т е м помещают в контейнер для контаминированных от­ ходов. После этого поверхность вытирают с использованием дезинфектанта. Все эти процедуры следует выполнять в перчатках, избегая прямого попадания на руки в перчатках дезинфицированного пролитого (расколотого) материала. Разбитое стекло или пластмассу следует собирать совком и щеткой. 2. Раны, полученные в результате укола иглой или другим острым предметом, порезы и к()жу, контаминированную вылившимся или выплеснзпгым жидким материалом для исследования, следует тщательно промыть водой с мылом. Желательно добиться вытекания крови из раны. 3. Обо всех случаях вытекания инфицированного материала, лабораторных авариях и о явной или потенциальной экс­ позиции к заразному материалу следует немедленно докла­ дывать руководителю лаборатории. Все доклады следует представлять в письменной форме. В таких случаях должны быть обеспечены медицинское обследование работников, наблюдение, лечение и, если потребуется, консультирова­ ние (см. т а к ж е с. 12).

Обработка и удаление контаминированного материала и отходов 1. Повторно используемые предметы, такие как наконечники пипеток, шприцы, канюли, иглы и пробирки для исследу­ емого материала, следует помещать в устойчивый к уколам * ОШеНпез оп вгепИхаНоп апЛ ёШп/есНоп тегЬЫа е}/есИуе ава1т( Нитап гттипоёеДаепсу у1гиз (Н1У). Второе издание, Ж е н е в а , Всемирная организация здравоохранения ( В О З , серия " С П И Д " № 2 ) . 10

2. С т а н д а р т н ы е и н с т р у к ц и и п о т е х н и к е б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с т и

2.

3.

4.

5.

металлический или пластмассовый контейнер, находящийся недалеко от рабочего места. Их предварительно дезинфи­ цируют, а затем очищают и автоклавируют или кипятят (приложение 3 и 4). Загрязненные лабораторные х а л а т ы и другую защитную одежду следует помещать в специальный контейнер, нахо­ дящийся внутри лабораторного помещения. Перед повтор­ ным использованием такой одежды ее следует автоклавировать, дезинфицировать и стирать. Загрязненные инструменты одноразового пользования, на­ пример щприцы, иглы и другие острые предметы, необхо­ димо помещать в устойчивый к уколам металлический или пластмассовый контейнер, помещенный вблизи рабочего места. Этот и другой контаминированный материал л у ч щ е всего автоклавировать, кипятить или дезинфицировать не­ посредственно на месте проведения исследований. В каче­ стве альтернативы его можно транспортировать с места работ в надежно изолированном непромокаемом контейнере в лабораторное подразделение для централизованного обез­ зараживания материалов с целью немедленного автоклавирования или сжигания. Бели контейнеры подлежат повтор­ ному использованию, их следует очипщть и дезинфициро­ вать. Сжигание можно считать предпочтительным методом уда­ ления контаминированных материалов и отходов, если печь для сжигания находится в лабораторном помещении и з а ней осуществляется лабораторный контроль. Если материал должен быть вынесен из помещения, его следует предва­ рительно автоклавировать или дезинфицировать каким-ли­ бо другим способом. Необходимо пользоваться мусоросжигателями стационарного типа (не менее 13(Ю°); для обес­ печения полного сжигания используют дополнительное топ­ ливо. Для использования мусоросжигателя и проведения контролируемого сжигания следует всегда получать разре­ шение соответствующих местных органов. Золу и мусор следует закапывать глубоко в землю. Захоронение деконтаминированного материала и отходов в контролируемом земельном участке является единственным приемлемым выходом, когда сжигание невозможно или не разрешено. Следует абсолютно точно убедиться в том, что любые материалы и отходы, удаляемые таким способом, и

Техника биологической безопасности для лабораторий, работающих с В И Ч

стерилизованы или дезинфицированы, а шприцы и иглы механически раздроблены. Все указанные материалы сле­ дует закладывать в траншеи, покрытые землей, с ежеднев­ ной утрамбовкой. Контролирумое место захоронения дол­ жно быть огорожено; всякая уборка в этом месте строго запрещается. 6. Радиоактивные материалы не следует сжигать; они подлежат удалению в соответствии с государственными законополо­ жениями и требованиями.

Медицинское обследование лабораторных работников 1. Лабораторные работники должны пройти первичное клини­ ческое обследование. У них берут первичную пробу сыво­ ротки крови, которую замораживают для возможного кон­ трольного исследования в будущем. Все результаты обсле­ дований являются конфиденциальвьши. 2. Бели лабораторный работник имел экспозицию (паренте­ ральную или через слизистые оболочки) к крови, другим биологическим жидкостям организма или к материалам, содержащим культуру вируса, то все эти материалы должны быть по возможности исследованы на наличие вируса и/или противовирусных антител. Бели исследуемый материал ока­ жется позитивным на антитела против В И Ч , вируса или антигена или ж е если он недоступен для исследования, то лабораторный работник должен быть подвергнут серологи­ ческому обследованию. Бму рекомендуют обратиться к вра­ чу, если в течение 12 мес после экспозиции у него возникнет какое-либо острое лихорадочное заболевание. Такое забо­ левание (особенно если оно сопровождается лихорадкой, сыпями или лимфаденопатией) может указывать на зара­ жение В И Ч . З а работником устанавливается медицинское наблюдение; его должным образом консультируют* и ре­ комендуют соблюдать меры предосторожности, направлен­ ные на предупреждение передачи ВИЧ-инфекции. Бели результаты серологического исследования окажутся отри* Более подробно см. Руководство по оказанию консультативной помоищ при ВИЧ-инфекции и СПИДе, Ж е н е в а , В с е м и р н а я организация здравоохранения, 1990 ( В О З , серия " С П И Д " , № 8). 12

2. С т а н д а р т н ы е инструкции п о т е х н и к е б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с т и

дательными, такой работник должен быть повторно обсле­ дован через 6 нед после экспозиции, а затем через 3 и 6 мес после экспозиции. 3. Необходимо учитывать все случаи заболеваний лаборатор­ ных работников и их невыхода на работу. Результаты об­ следования лабораторных работников на ВИЧ-инфекцию являются конфиденциальными.

13

3. Дополнительные инструкции для серологаческих лабораторий Стандартные инструкции по технике биологической без­ опасности должны быть дополнены в отношении серологиче­ ских лабораторий следующими требованиями, касающимися лабораторных помещений и оборудования.

Лабораторные помещения и оборудование 1. Желательно, чтобы работа с заведомо контаминированным В И Ч материалом проводилась в отдельной лаборатории или помещении,специально предназначенном только для этой работы. Бели это невозможно, внутри лаборатории должно быть выделено и четко обозначено изолированное рабочее место для проведения серологических исследований. 2. Д л я серологического исследования материала, зараженного В И Ч , не требуются специальные ручные боксы для биоло­ гической защиты. Бели необходимо, следует применять з а ­ щитные очки, экраны для лица и другие приспособления такого типа с целью защиты глаз и лица от расплескиваний жидкости и попадания инородных тел. 3. Необходимо отвести достаточную площадь для проведения лабораторных процедур. 4. Стены, потолок и пол должны быть гладкими, легко под­ дающимися очистке, непроницаемыми и устойчивыми к химическим веществам и дезинфектантам, обычно исполь­ зуемым в лаборатории. Пол не должен быть скользким. 5. Поверхности сидений должны быть непроницаемыми и ус­ тойчивыми к дезинфектантам, кислотам, щелочам, органи­ ческим растворителям и умеренному нагреванию. 6. Лабораторная мебель должна быть крепкой и легко подда­ ющейся очистке. 7. Во всех лабораторных комнатах должны быть умывальные раковины, желательно около выхода. 8. Двери в лабораторные помещения должны быть самозамы­ кающимися и иметь выступающие панели. 9. Потребности в специальной вентиляции нет. Необходимость

3. Д о п о л н и т е л ь н ы е инструкции д л я с е р о л о г и ч е с к и х л а б о р а т о р и й

В системе механической вентиляции отсутствует. Открыва­ ющиеся окна должны быть защищены от мух сетками. 10. Автоклав для обезвреживания заразных лабораторных ма­ териалов и отходов должен находиться в том ж е здании, что и лаборатория для исследований в области ВИЧ-инфек­ ции. И . Места для хранения верхней одежды и личных вещей, а также для приема пищи, питья и курения должны нахо­ диться вне рабочего помещения.

15

4. Инструкции для лабораторий, в которых производится выделение вируса Стандартные инструкции по технике биологаческой без­ опасности, приведенные в разделе 2, должны быть дополнены для лабораторий, в которых производится выделение вируса, следующими приводимыми ниже требованиями относительно лабораторных помещений и оборудования и дополнительными инструкциями по соблюдению мер предосторожности в работе и по медицинскому обследованию сотрудников. Стандартные инструкции должны быть дополнены в связи с тем, что работ­ ники лабораторий могут обрабатывать материалы, содержащие вирус в высокой концентрации.

Лабораторные помеидения и оборудование 1. Требования к лабораторным помещениям те ж е , что и для серологаческих лабораторий (с. 14). Весьма желательно, чтобы вся лаборатория или отдельная комната в лаборато­ рии были отведены только для работы с материалом, зара­ женным В И Ч . Может потребоваться место для установки защитного бокса и вытяжного ш к а ф а , а также для такого необходимого оборудования, как холодильник, центрифуга и термостат. 2. Ручные боксы для биологаческой защиты — это оптимальное оборудование для работы с заразными микробами и для процедур, при которых образуются аэрозоли или мелкие капли. Однако эти боксы могут быть неэффективными и потенциально опасными, если они неправильно установле­ ны, нерегулярно обслуживаются и не подвергаются повсед­ невному контролю (приложение 5). 3. Процедуры, которые обычно выполняются в ручном защит­ ном боксе, могут т а к ж е выполняться в вытяжном шкафу. 4. Для предупреждения случайного распыления материала из центрифуга во время работы следует пользоваться герме­ тичными ("безопасными") центрифужными стаканами или 16

4. Инстружции для л а б о р а т о р и й , в к о т о р ы х п р о и з в о д и т с я в ы д е л е н и е в и р у с а

роторами. Их необходимо загружать и разгружать в боксе для биологической з а п щ т ы или с помощью других изоли­ рующих устройств.

Меры предосторожности при работе 1. Вход в лабораторию должен быть разрешен только л и ц а м , присутствие которых требуется для выполнения программы исследований или для оказания помощи сотрудникам. 2. Все процедуры, связанные с обработкой зараженных кле­ точных культур или с материалом, содержащим вирус в высокой концентрации, а т а к ж е все виды работ, при кото­ рых образуются аэрозоли или мелкие капли, должны вы­ полняться с помопц>ю физического изолирующего оборудо­ вания, такого как защитные боксы, герметичные центри­ фужные стаканы или роторы. 3. Перед тем как войти в лабораторию, сотрудники должны надевать чистую лабораторную одежду или халат. Если эти предметы заражаются или загрязняются, их меняют. Когда сотрудник по какой-либо причине выходит л з лаборатории, он должен снимать рабочую одежду и оставлять ее в лабо­ ратории.

Медицинское обследование сотрудников Необходимо проводить медицинские обследования всех л а ­ бораторных работников. У каждого сотрудника берут первич­ ную пробу сыворотки крови, которую замораживают для по­ следующего контрольного исследования (см. с. 12).

17

5. Инструкции для научно-исследовательских и производственных лабораторий Стандартные инструкции по технике биологаческой без­ опасности, приведенные в разделе 2, должны быть дополнены для производственных лабораторий, которые вырабатывают в течение любого ограниченного периода не менее 10 л суспензии вируса, следующими приводимыми ниже требованиями отно­ сительно лабораторных помещений и оборудования и допол­ нительными инструкциями по соблюдению мер предосторож­ ности в работе (предупреждение аварий, рассеивания матери­ ала и т.п.) и по проведению медицинского обследования со­ трудников (как указано в ы ш е ) . Стандартные инструкщш дол­ жны быть усилены таким образом в связи с тем, что в процессе работы указанных лабораторий производятся материалы, со­ держащие вирус в высокой концентрации, и сотрудники ра­ ботают с этими концентрированными вирусными препаратами.

Лабораторные помещения и оборудование 1. Вход в лабораторное помещение из коридора должен осу­ ществляться через вестибюль с двумя дверями, комнату для смены одежды с двумя дверями, воздушный о ш ю з и другае сходные физические устройства. 2. Внутренние поверхности комнаты (пол, стены, потолок) должны быть водоотталкивающими и легко поддаюпцшися очистке. Отверстия в этих поверхностях (для служебных труб и проходов, электропроводки и т.п.) должны быть герметизированы для более надежной деконтаминации пло­ щади. 3. У входной двери должно находиться устройство для мытья с раковиной, приводимое в действие автоматически или с помощью стопы, колена или локтя. 4. Входные двери должны быть самозамыкающимися. 5. Окна в лаборатории должны быть закрытыми и непроница­ емыми. 18

5. И в с т р у к ц и и ддя н а у ч н о - и с с л е д о в а т е л ь с к и х и п р о и з в о д с т в е н н ы х л а б о р а т о р и й

6. В каждой лаборатории должна быть оборудована система труб вытяжной вентиляции, обеспечивающая направлен­ ный ток воздуха через входное отверстие внутрь лаборато­ рии и поддерживающая в лаборатории отрицательное дав­ ление по отнощению к внешнему пространству. Выпущен­ ный наружу воздух не рециркулирует, а вьвделяется через специальную герметичную вытяжную систему вдали от жи­ лых районов и воздухопоглощающих устройств. Этот отка­ чиваемый воздух может выделяться наружу непосредствен­ но без прохождения через высокоэффективный воздушный фильтр для мелких частиц (НЕРА) и не подвергаться ни­ каким другим видам обработки, если он выходит через вентиляционную систему здания. Если есть механическая система подачи воздуха, она должна быть соединена с ме­ ханической вытяжной системой, чтобы предупредить гер­ метизацию лаборатории в случае выхода из строя вытяж­ ного вентилятора. 7. Профильтрованный через Н Е Р А воздух, выпускаемый из боксов для биологической защиты, должен быть отведен наружу непосредственно или через систему вытяжной вен­ тиляции зданий. Этот воздух может рециркулировать внут­ ри лаборатории, если бокс регулярно проверяется и его безопасность официально удостоверена в течение предшествуюпцис 12 мес. Если воздух выводится из лаборатории через вытяжную систему здания, то вытяжная система бок­ са должна быть соединена с ней таким образом, чтобы исключить нарушение воздушного баланса в боксе или в вытяжной системе здания (например, путем соединения через втулку). 8. Автоклав для обезвреживания лабораторных отходов должен находиться внутри лаборатории или в том ж е здании. 9. Необходимо пользоваться герметичными центрифужными ("безопасными") стаканами или роторами, которые следует загружать и открывать в запщтном боксе.

Меры предосторожности при работе 1. Вход в лабораторию должен быть разрешен только лицам, присутствие которых требуется для выполнения программ исследований или для оказания помощи сотрудникам. 2, Все процедуры, связанные с обработкой зара^^енных кле19

Техника биологической безопасности для лабораторий, работающих с В И Ч

точных культур или с материалом, содержащим вирус в высокой концентрации, а т а к ж е все виды работ, при кото­ рых образуются аэрозоли или мелкие капли, должны про­ водиться в боксах для биологической безопасности (прило­ жение 5).

Лабораторные аварии, сопровождающиеся выделением аэрозолей Если в лаборатории произошла авария (например, поломка центрифуги или гомогенизатора), в ы з в а в ш а я рассеивание аэрозоля во внешней среде, то все сотрудники лаборатории должны задержать дыхание и немедленно покинуть лаборато­ рию, закрыть дверь и сообщить о случившемся руководителю лаборатории. При этом система вытяжной вентиляции и боксы для биологической защиты должны оставаться в рабочем со­ стоянии, чтобы вентилировать помещение лаборатор1ш. Со­ трудники в соответствующей защитной одежде могут вновь войти в лабораторию через 30 мин, чтобы провести дезинфек­ цию пораженного оборудования и помещения.

Медицинское обследование сотрудников Необходимо проводить медицинское обследование всех со­ трудников лаборатории. У каждого из них берут первичную пробу крови, которую хранят в замороженном виде для по­ следующего контрольного исследования (см. с. 12).

20

6. Инструкции по мерам защиты при обработке и транспортировке проб Обработка, перенос и транспортировка неправильно упако­ ванных проб для исследования связаны с риском заражения всех людей, непосредственно выполняющих эту работу, и кон­ тактирующих с ними лиц на всех стадиях указанных процес­ сов. Неправильная обработка проб в лаборатории создает опас­ ность не только для лабораторных работников, участвующих в этой работе, но также для административного, канцелярского и другого вспомогательного персонала. Перенос проб между разными лабораториями и учреждениями повышает степень опасности, которой подвергаются население, работники транс­ порта и почтовые служащие.

Транспортировка проб — общие указания 1. Контейнеры для проб должны быть изготовлены из непро­ ницаемых и устойчивых к повреждениям материалов — пластмассы или стекла. Закрывать контейнеры желательно плотно завинчивающимися колпачками. 2. После того как контейнер закрыт и герметизирован, его следует обработать дезинфектантом — раствором гипохло­ рита с концентрацией активного хлора 0,1 % (1 г / л , 1000 ч / м л н ) , а затем просушить его поверхность. 3. Когда поступила проба, прежде чем открыть контейнер, его необходимо обтереть дезинфектантом, как было указано выше. 4. Внутри медицинского учреждения и лаборатории контейне­ ры для проб должны находиться в штативах в вертикальном положении. После помещения пробирок в штативы послед­ ние должны переправляться или транспортироваться в гер­ метичных пластмассовых или металлических контейнерах на случай возможного протекания или выливания матери­ ала. 5. Контейнеры для проб в штативах, транспортируемые из 21

Т е х н и к а б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с г а для л а б о р а т о р и й , р а б о т а ю щ и х с В И Ч

мЬста забора проб или из одной лаборатории в другую автотранспортом, должны н а х о д ш ъ с я в герметичных пла­ стмассовых или металлических ящиках с надежными плот­ но пригнанными крыщками. 6. В некоторых районах, не имеющих надежных источников электроэнергии, может возникнуть необходимость в транс­ портировке и хранении проб в баках с жидким азотом, обеспечивающих сохранность проб в течение длительного времени.

Перевозка проб общественным транспортом Комитет экспертов ООН по транспортировке опасных гру­ зов, Международная ассоциация воздушного транспорта (МА­ Т А ) , Всемирный почтовый союз ( У П У ) , Международная ор­ ганизация гражданской авиации (ИКАО) и Всемирная орга­ низация здравоохранения (ВОЗ) разработали правила транс­ портировки проб по почте, воздушным путем и другими видами транспорта. Э т и правила могут быть суммированы следующим образом: 1. К а ж д а я проба должна быть помещена в водонепроницаемый приемник, изготовленный из высококачественного стекла или пластмассы. Приемник должен плотно закрываться, чтобы предупредить вытекание жидкости. Завинчивающие­ ся колпачки и пробки должны быть закреплены проволо­ кой, липкой лентой или каким-либо другим надежным способом. 2. Контейнер для проб (первичный приемник) должен быть обернут достаточным количеством абсорбирующего матери­ а л а (например, бумажными салфетками или тканью, гиг­ роскопичной ватой, це^^люлозной прокладкой) для адсорб­ ции жидкости в случае ее протекания (рис. 1,а). 3. Обернутый контейнер с пробой следует вложить во второй прочный водонепроницаемый контейнер (вторичный при­ емник). В этот водонепроницаемый контейнер может быть помещено несколько контейнеров с пробами. Следует ис­ пользовать достаточно поглощающего материала (в допол­ нение к требованию 2, см. в ы ш е ) , чтобы плотно разместить контейнеры с пробами внутри вторичного контейнера (рис. 1,6). 22

6. И н с т р у к ц и и п о м е р а м з а щ и т ы п р и обрабкпке и т р а н с п о р т и р о в к е п р о б Р и с . 1. Рекомендуемые контейнеры для у п а к о в к и потенциально инфицированных В И Ч проб для пересылки по почте, воздушным транспортом или другим общепринятым способом.

(а) Контейнер для пробы, обернутый п о г л о щ а ю щ и м материалом.

(б) Обернутый контейнер с пробой, помещенный в прочный водонепроницаемый футляр.

23

и ш м б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с т и для л а б о р а т о р и й , р а б о т а ю щ и х с В И Ч

(в) Вторичный контейнер, помещенный в прочную коробку.

(г) Описание пробы и другие сведения на этикетке контейнера.

24

6. И я с ф у к ц н и п о м е р а м з а щ и т ы п р и о б р а б о т к е и т р а н с п о р ш р о к е п р о б

4. Вторичный контейнер должен быть помещен в коробку, достаточно крепкую для того, чтобы защитить ее содержи­ мое от механических повреждений при пересылке (рис. 1,в). 5. Перед отправкой проб необходимо составить предваритель­ ное соглашение о сборе проб, их пересылке и т.п. между отправителем, транспортной организацией и лабораториейполучателем. 6. К наружной стенке вторичного водонепроницаемого контей­ нера должны быть прикреплены формуляры, этикетки и другие виды письменной информации, которые идентифи­ цируют или характеризуют пробу (рис. 1,г). 7. Необходимо соблюдать национальные и международные пра­ вила пересылки и транспортировки материалов.

25

Инструкции по сбору проб крови Основная опасность для лабораторных работников, берущих пробы крови, заключается в контаминации рук во время этой процедуры и в проникающих поражениях рук, которые могут бьпъ нанесены иглами и другими острыми инструментами и предметами. В приводимых ниже указаниях описаны практи­ ческие приемы и процедуры, направленные на сведение к минимуму таких случаев. 1. Посмотрите, нет ли у Вас на руках порезов, царапин и других повреждений кожи. Если кожа повреждена, наденьте перчатки. Если кровь попала на перчатки, их надо выбро­ сить. 2. Старайтесь избежать контаминации при заборе крови. 3. Мойте руки с водой и мылом сразу же после любой конта­ минации кровью и после окончания работы. 4. Если Вы носите перчатки, то после того, как сняли их, мойте руки водой с мылом. 5. Надевайте лабораторный халат. 6. Помещайте иглы и шприцы в контейнер, устойчивый к проколам. Не надевайте использованные иглы на шприц. Н е снимайте иглы со шприцев. Не пользуйтесь остроконеч­ ными ножницами. 7. Надежно герметизируйте контейнеры для проб. Протирайте наружную поверхность контейнера, на которой не должно быть никаких следов крови, дезинфектантом (например, раствором гипохлорита с концентрацией активного хлора 0,1 % (1 г / л , 1000 ч/млн) (приложение 3). 8. При уколах кожи иглой или другим острым предметом, а т а к ж е при ранении кожи тщательно мойте руки водой с мылом. Добейтесь вытекания крови из раны. 9. О каждом загрязнении рук или тела кровью, а также о колотых ранах и порезах сообщайте руководству лаборато­ рии и органов здравоохранения.

Избранная дополнительная литература Аду180гу Сопшипее оп Оап^егоиз РаШо^епя. ЬАУ/НТЬУ-Ш — 1Ие саияаНуе а^еШ о / А1В8 апй гекЛей согиИйопз. Ъаадоп, Нег Ма]е81у'8 $1а11опегу ОШсе, 1986. А108 яиШеИпез /ог тгсгоЬШоеу 1аЬога1огу. ОНат^а, ЬаЬогаЮгу СеШег ^а^ 01$еа8е Соп1го1, 1986. А 1 0 8 Т а з к Рогсе. ЬаЛхя-аизгу Ыова^е1у ^иЫеНпеа. СапЬегга, С о у е т т е Ш РиЬИвЫп^ 8 е т с е , 1986. С е т е г з Гог 018еа5е С о п т ) 1 япй К а й о п а ! ЫяИшгез о? НеаИЬ. Ви>$а^егу 1п т1сгоЫо1о81са1 ап4 Ыотейгса! ЬЪогагошв. АНапШ, ОА, 0 8 ВерагйпеШ о1 Неа1Й1 апс1 Ншпап З е т с е » , 1988 ( Н Н 8 РиЬНсайоп Ыо. ( С О С ) 88-8395). С о Ш п з , С . Н. ЬаЬогагогу-асдшгес1 т/есИоп8: НШогу, ШсШепсе, саиаев апй ргеуепйоп, аесопд е ё Ш о п . Ьопдоп, ВиПепкгогЛв, 1988. ОиШеНпеа оп $1епи2аиоп апй сИзш/есйоп те1кой8 е^есШе сща^п8^ Нитап ШтипЫе/кгепсу пгиз (Н1У), зесопй еШйоп. Оепеуа, АУогй НеаИЬ Ог^ашгайоп, 1989 (У^НО А Ш 8 8епе8, N 0 . 2). ЬаЬогаШу Ыо8а/е(у тапиа1. О е п е у а , ^Vог1д Н е а И Ь Ог8ап12а«оп, 1983. }У(^кт^ 8а/е1у Н1У т 1Не гезеагсН 1аЬога1огу. ВеШевда, М О , Найопа! Ы я й Ш е з оГ Н е а Ш , 1988.

27

Приложение 1

Процедуры, связанные с потенциальным риском экспозиции к ВИЧ Процедура З а б о р пробы крови Л и ц а , подвергающи­ еся риску Пациент Механизм передачи инфекции Контаминированная игла Загрязненные р у к и или перчатки медицинского работника Укол к о ж и иглой или поврежден­ ный контейнер для пробы Контаминация рук кровью Контаминация н а р у ж н о й поверхности контейнера Повреждение контейнера Вытекание или расплескивание Укол к о ж и ; контаминация к о ж и или слизистых оболочек Загрязнение н а р у ж н о й поверхности контейнера для проб Контаминация поверхности на рабочем месте Вытекание или расплескивание пробы Повреждение контейнера для пробы Перфорирование перчаток Укол или загрязнение к о ж и Вытекание или расплескивание Контаминация поверхности на рабочем месте Контакт с контаминированными отходами Колотые раны или порезы

Медицинский работник Перенос проб (внут- Лабораторный ри лаборатории) персонал Работник транспорта С е р о л о г и ч е с к и е и Лабораторный в и р у с о л о г и ч е с к и е персонал исследования, свя­ занные с В И Ч

Очистка оборудова- Лабораторный ния и уход з а н и м персонал Вспомогательный персонал Удаление отходов Лабораторный персонал Вспомогательный персонал Работник транспорта Население

Т р а н с п о р т и р о в к а Работники проб (в другие цен- транспорта тры) Почтовые работники Население

Повреждение или протечка контейнеров и других видов упаковки для проб

28

Приложение 2

Выбор перчаток и обращение с ними Сотрудникам лаборатории, которые работают с пробами крови или другими жидкостями, потенциально инфицирован­ ными ВИЧ, обычно рекомендуют носить перчатки. Перчатки снижают опасность контаминации проб кровью, но не предуп­ реждают проникающих повреждений или порезов, вызываемых иглами, другими острыми инструментами, а т а к ж е осколками стекла или пластмассы. Следует помнить, что перчатки — это только вспомогательное средство, не заменяющее эффектив­ ных мер по предупреждению заражения (таких как мытье рук). При использовании перчаток в лаборатории следует соблю­ дать следующие основные меры предосторожности: 1. Надевайте перчатки при всех видах работы с потенциально заразными материалами. Лаборатории, работающие с В И Ч , должны снабжаться достаточным количеством перчаток вы­ сокого качества; в бюджете лабораторий должны быть пре­ дусмотрены для этого соответствующие статьи расходов. 2. Выбрасывайте перчатки при подозрении на контаминацию; мойте руки и надевайте новые перчатки. 3. Не касайтесь руками в перчатках глаз, носа, а т а к ж е других слизистых оболочек или кожи. 4. Не покидайте рабочего места и не передвигайтесь по лабо­ ратории в перчатках. 5. Мойте руки после того, как сняли перчатки.

Выбор перчаток Для рутинного использования (первичный осмотр лабора­ торного материала и т.п.) пригодны нестерильные перчатки из винила или латекса ("смотровые перчатки"). Их следует использовать только однократно. Общеупотребительные пла­ стиковые перчатки, обычно обозначаемые как "резиновые" или "домашние", пригодны для очистки инструментов, процедур 29

Т е к ш ш а биологической безопасноста для лабораторий, работающих с В И Ч

обеззараживания и других действий, не требующих тонкой ручной работы. Такими перчатками можно пользоваты:я по­ вторно.

Обращение с перчатками 1. Хирургические и "смотровые" перчатки предназначены толь­ ко для одноразового использования. Т е м не менее в ряде случаев этими перчатками можно пользоваться повторно. И х можно обрабатывать следую1Щ1м способом: (а) тщательно промыть руки в перчатках раствором гапо­ хлорита (с содержанием активного хлора 0,1 % ) (при­ ложение 3); (б) промыть руки в перчатках чистой водой, чтобы удалить дезинфектант (который может вызвать повреждение пер­ чаток); (в) вымьпъ руки в перчатках водой с мылом, а затем тщательно ополоснуть их (детергенты могут "портить" перчатки, т.е. усиливать проникновение жидкости через невидимые отверстия в перчатках); (г) снять перчатки и повесить их з а манжеты для просу­ шивания; (д) перед повторным использованием перчаток проверить их на герметичность, для этого заполнить перчатки во­ дой (325 + 25 мл) комнатной температуры, закрутить манжеты перчаток на 360* и положить перчатки на подставку на 2 мин. Проверить вытекание воды путем осмотра и ощупывания. П о возможности посыпать пер­ чатки перед повторным использованием тальком или тальковой присыпкой. 2. Обычные рабочие перчатки широкого назначения могут быть использованы повторно, однако от них следует отказаться, если обнаруживаются различные признаки износа — рас­ слаивание, трещины, обесцвечивание, проколы или разры­ вы. Обработка рабочих перчаток перед повторным исполь­ зованием проводится следующим образом: (а) тщательно обработать руки в перчатках раствором га­ похлорита (с концентрацией активного хлора 0,1 %) (приложение 3); 30

В ы б о р перчаток и о б р а щ е н и е с н и м и

(б) сполоснуть руки в перчатках чистой водой, чтобы уда­ лить дезинфектант; (в) вымойте руки в перчатках водой с мылом и тщательно сполосните их; (г) снять перчатки и повесить за манжеты для просушива­ ния; (д) вымыть руки; (е) проверить перчатки на герметичность, как описано в пункте 1(е).

31

приложение 3

Стерилизация и дезинфекция с помощью процедур стерилизации и применения дезинфектантов, обычно употребляемых в лабораториях и медицин­ ских учреждениях, удается инактивировать В И Ч при исполь­ зовании концентраций, более низких по сравнению с теми, которые широко применяются на практике. Наиболее эффек­ тивным методом инактивации В И Ч является нагревание, и поэтому автоклавирование или кипячение являются методами выбора, особенно при обработке медицинского инструментария и лабораторного оборудования, предназначенного для повтор­ ного применения. Химические дезинфектанты менее надежны, но они широко применяются для деконтаминации лаборатор­ ного оборудования общего назначения. Все инструменты и предметы многоразового использования должны обязательно подвергаться очистке и дезинфекции пе­ ред повторным употреблением.

Стерилизация паром Стерилизация паром (автоклавирование) — предпочтитель­ ный метод стерилизации повторно используемого оборудова­ ния, в т о м числе игл и шприцев. Автоклавы и котлы под давлением должны находиться в действующем состоянии не менее 20 мин после того, как достигнута температура 1 2 Г С (250° Р ) , эквивалентная давлению, превышающему атмосфер­ ное на 1 атмосферу (101 кРа, 15 ф у н т / к в . д ю й м ) . Автоклав не должен быть перегружен. Недорогой заменой автоклава является модифицированный котел под давлением, созданный совместно ВОЗ и Ю Н И ­ СЕФ*». в основу положены ОиШеНпев оп НепИгаНоп апё ёШп/есПоп пШНое1$ еЦесНуе а^ахпвХ Нитап ттш1ойе/1с1епсу шив (Н1У), 2-е и з д . , Ж е н е в а , Всемирная организация здравоохранения, 1989 ( В О З , серия " С П И Д " , № 2 ) . Более полную и н ф о р м а ц и ю м о ж н о получить и з следующих источников: ЁхрапЛей Ргоегатте оп ШтипХхаНоп (ЕР1), \УогШ НеаНН Ог^ашгаНоп, 1211 Оепеш 27, 8т11ег1апа; 1/ЮРАС (ЦМГСЕР РгоситетеШ аш1 МхетЫу СеШге), РгеероП, ПК 2100, СорепНаееп, Оептагк. 32

Стерилизация и дезинфекция

Стерилизация сухим жаром Стерилизация сухим жаром пригодна для инструментов и оборудования, выдерживающих температуру 170° С (340° Р ) . Предметы, изготовленные из пластмассы, могут не выдержать такую температуру. Для стерилизации сухим жаром вполне пригодна обычная домашняя печь. Для завершения стерили­ зации при 170° (340° Р) требуется не менее 2 ч.

Кипячение При отсутствии автоклава наиболее простым и надежным методом инактивации большинства патогенных микробов, в том числе ВИЧ, является кипячение. Высокоэффективная дез­ инфекция инструментов и оборудования достигается при не­ прерывном кипячении в течение 20—30 мин.

Химическая дезинфекция В лабораторных опытах было установлено, что многие дез­ инфектанты, рекомендуемые для использования в медицин­ ских учреждениях, инактивируют В И Ч . Однако на практике химические вещества не всегда оказываются надежными, так как они могут инактивироваться кровью иди другими органи­ ческими субстанциями. Кроме того, они требуют весьма т щ а ­ тельного приготовления. Следует т а к ж е отметить, что хими­ ческие дезинфектанты быстро теряют активность, особенно если хранятся в теплом месте. Метод химической дезинфекции не должен применяться для обработки игл и шприцев. Что касается других инвазивных инструментов, а также предметов, используемых для прокола кожи, этим методом следует пользоваться только в крайних случаях, когда невозможна стерилизация или эффективная дезинфекция путем кипячения. Необходимыми условиями в этих случаях являются гарантия высокой концентрации и ак­ тивности химического дезинфектанта, а т а к ж е тщательная очистка инструментов перед погружением в раствор дезинфек­ танта с целью удаления видимых загрязнений. Удаление этих загрязнений необходимо потому, что они препятствуют про33

Т е х н и к а б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с г а для л а б о р а т о р и й , р а б о т а ю щ и х с В И Ч

никновению дезинфектантов в органические субстанции, такие как сгустки крови и засохшая кровь. Другие инструменты (кроме используемых для прокалывания кожи) должны быть тщательно вытерты насухо перед погружением в раствор дез­ инфектанта, поскольку повторное погружение влажных инст­ рументов может привести к разбавлению этого раствора и снижению его активности.

Гипохлорит натрия Растворы гипохлорита натрия (отбеливатель, жавелева вода и др.) — отличные универсальные дезинфектанты. Раствор дезинфектанта, широко используемый в лабораториях для раз­ личных целей (протирание рабочих сидений и контейнеров для проб, очистка перчаток и т.п.), имеет концентрацию ак­ тивного хлора 0,1 % (1 г / л , 1000 ч / м л н ) . Более крепкий раствор, применяемый в лабораториях для дезинфекции сильно загрязненного оборудования, разлившейся крови и т.п., должен иметь концентрацию активного хлора, равную 1,0 % (10 г/л, 10 ООО ч / м л н ) . Разведение растворов гипохлорита натрия (соотно­ шение между количеством основного раствора и кол и ч е с т ю м воды) 5 % основной раствор 0,1 % (1 г / л , 1000 ч / м л н ) 1.0 % (10 г / л , 10 ООО ч / м л н ) 1:50 1:5 10 % основной раствор 1:100 1:10 15 % основной раствор 1:150 1:15

Концентрация

В процессе приготовления раствора гипохлорита натрия следует очень точно измерять ингредиенты, поскольку кон­ центрация активного хлора в основных (маточных) растворах варьирует в зависимости от страны изготовления. В некоторых странах концентрация раствора гипохлорита натрия выража­ ется в хлорометрических градусах С с Ы о г о т . ) ; Г сЫогош. приблизительно соответствует 0,3 % активного хлора. • 34

Отбеливатель для бытового употребления обычно содержит 5 % активного хлора.

Стерилизация и дезинфекция

• • •

Жавелева вода (15° с Ы о г о т . ) содержит приблизительно 5% активного хлора. Жавелева вода (48° с Ы о г о т . ) содержит приблизительно 15% активного хлора. Хлорная известь содержит приблизительно 35 % активного хлора.

Растворы гипохлорита натрия постепенно теряют актив­ ность; поэтому следует ежедневно готовить свежие растворы. Активность растворов гипохлорита нейтрализуется кровью, сы­ вороткой и другими субстанциями, содержащими белок. Вслед­ ствие этого необходимо регулярно заменять растворы дезин­ фектанта.

2. Гипохлорит кальция Гипохлорит кальция имеется в виде порошка, гранул и таблеток. Это вещество разлагается медленнее, чем гипохлорит натрия. Гипохлорит кальция обычно выпускается с содержа­ нием активного хлора, равным 70 % . Для того чтобы получить раствор, содержащий 0,1 % активного хлора, следует раство­ рить 1,4 г сухого химикалия в 1 л воды. 1,0 % раствор получают путем растворения 1,4 г сухого вещества в 1 л воды.

3. Дихлоризоцианурат натрия ( N а ^ С С ) М а В С С обычно выпускается в форме таблеток с содержа­ нием активного хлора, равным 60 % . Для того чтобы получить из этого препарата раствор, содержащий 0,1 % активного хлора, следует растворить 1,7 г МаОСС в 1 л воды. 1,0 % (по активному хлору) раствор получают, растворяя 17 г сухого препарата в 1 л воды. Таблетки выпускаются т а к ж е с содержанием активного хло­ ра 1,5 г. Растворяя 1 таблетку в 1 л воды, получают 0,1 % раствор, годный к употреблению. К а О С С — вещество, более стабильное, чем гипохлорит натрия и гипохлорит кальция.

4. Хлорамин Хлорамин выпускается в форме порошка или таблеток; он обычно содержит 25 % активного хлора. Ввиду того что хло­ рамин выделяет хлор медленнее, чем другие препараты-хлора, 35

Т е х н и к а б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о с т и для л а б о р а т о р и й , р а б о т а ю щ и х с В И Ч

для эффективной дезинфекции требуются более высокие кон­ центрации этого препарата. Д л я получения дезинфицирующего раствора широкого на­ значения рекомендуется растворять 20 г сухого вещества в 1л воды. Для дезинфекции сильно загрязненного оборудования, разлитой крови и т.п. рекомендуется растворить 20 г препарата в 1 л воды. Хлорамин более стабилен, чем гипохлорит натрия и гипо­ хлорит кальция.

5. Этанол (этиловый спирт) и 2-пропанол (изопропиловый спирт) Этанол и 2-пропанол — эффективные дезинфектанты, осо­ бенно для обработки таких поверхностей, как лабораторные сиденья и наружные поверхности контейнеров для проб. В целях достижения максимальной эффективности их следует использовать в концентрации 70 % (70 % алкоголя, 70 % воды).

6. Йод-поливидон (РУ1) Активность дезинфектантов-йодофоров сходна с таковой у растворов гипохлорита. Йодофоры — более дорогостоящие, но более стабильные препараты; они обладают менее выражен­ ными коррозионными свойствами (их, однако, не следует при­ менять для обработки изделий из алюминия или меди).

7. Формалин Формалин — отличный дезинфектант, однако он применя­ ется в ограниченных масштабах, поскольку раствор формалина и выделяемые пары токсичны и обладают выраженным раз­ дражающим действием. Формалин содержит 35-40 % формаль­ дегида, 10 % метанола и воду. Для использования в качестве дезинфектанта формалин следует разводить в соотношении 1:10 (для получения раствора, содержащего 3,5-4 % формаль­ дегида). Перед повторным использованием им вытирают обо­ рудование. 36

Стерилизация и дезинфекция

8. Глутарал (глутаральдегид) Глутарал — высококачественный дезинфектант, часто при­ меняемый для дезинфекции чувствительного к нагреванию оборудования и инструментария многоразового использования. Глутарал обычно применяется в виде 2 % водного раствора. В целях активации дезинфектанта к нему добавляют порошок или жидкость, поставляемые вместе с раствором. Погружение предмета в активированный раствор глутарала вызывает гибель вегетативных бактерий, грибков и вирусов менее чем за 30 мин. Для разрушения спор требуется погру­ жение в раствор не менее, чем на 10 ч. Обработанные предметы следует тщательно промыть водой. Активированные растворы следует хранить не более 2 нед или в соответствии с инструкциями фирмы-производителя.

37

Приложение 4

Обработка повторно используемых игл и шприцев При всех видах медицинского обслуживания больных и при всех лабораторных процедурах желательно пользоваться ш п р и ц а м и и иглами одноразового применения. Если поль­ з о в а т ь с я для забора жидкости шприцами с з а м ы к а ю щ и м и устройствами для игл или неразъемными шприцами с иглами (одно- или многоразового применения), то эту жидкость можно в случае необходимости вылить из ш п р и ц а , не под­ вергаясь никакой опасности. Однако в ряде случаев (по экономическим и практическим причинам) м о ж е т возник­ нуть необходимость в использовании шприцев и игл, повтор­ но применяемых и подвергающихся стерилизации. Обяза­ тельным требованием в этих случаях является деконтаминация игл и шприцев перед их повторной обработкой с последующим использованием. Ниже приводится метод обработки шприцев и игл много­ разового использования. В этих случаях следует обязательно надевать перчатки и соблюдать большую осторожность в работе с целью предупреждения уколов иглой и/или порезов. — Н е снимайте иглу со шприца. — Наберите в шприц раствор гипохлорита или какой-либо другой пригодный дезинфектант, содержащий 0,1 % актив­ ного хлора (приложение 3). — Опустите шприц с прикрепленной к нему иглой в раствор дезинфектанта и оставьте его в горизонтальном положении в лотке с плоским дном. — Оставьте шприц и иглу в растворе дезинфектанта на 20 мин. — Вылейте раствор дезинфектанта из шприца и иглы. — Промойте шприц и иглу водой, несколько раз наполняя и опорожняя их. — Осмотрите иглы и шприцы, чтобы установить, нет ли в 38

о б р а б о т к а повторно и с п о л ь з у е м ы х игл и ш п р и ц е в

иглах зазубрин, цел ли сальник шприца (резиновое коль­ цо), плотно ли пригнана втулка иглы к шприцу, заметны ли деления на стенке шприца и т.п. — Перед повторным применением иглы и ш п р и ц а простер и л и з у й т е их п у т е м а в т о к л а в и р о в а н и я (в п а р о в о м с т е ­ рилизаторе) или кипячения в т е ч е н и е 20 мин (прило­ ж е н и е 3).

39

Приложение 5

Боксы для биологической безопасности и другое изолирующее оборудование Нет никаких данных о том, что В И Ч или другие ретровирусы передаются ингаляционным путем. Точно т а к ж е отсут­ ствуют доказательства того, что вдыхание аэрозолей играет роль в передаче инфекции, вызываемой возбудителем гепа­ тита В. В то же время показано, что исключительно трудно получить аэрозоли из крови в связи с величиной частиц и вязкостью компонентов. Поэтому лаборатории, занимающие­ ся серологическими исследованиями и гематологическим скри­ нингом, не испытывают настоятельной необходимости в за­ щите от аэрозолей с помощью ручных боксов или других изолирующих устройств. Однако боксы для биологической защиты и другие изолирующие приспособления требуются в ходе таких процедур с исследуемыми пробами, содержащими другие патогенные микробы (против которых требуется изо­ л я ц и я ) , при выделении вируса, а т а к ж е в тех случаях, когда В И Ч концентрируется или очищается в количествах, более высоких, чем это необходимо для диагностических процедур (например, при получении и обработке концентрированного ВИЧ). Боксы для биологической защиты (классов I и П, см. ниже) и другие соответствующие устройства для персональной защи­ ты или физической изоляции (например, защитная одежда, маски, перчатки, защитные очки, респираторы, безопасные центрифужные стаканы, герметичные центрифужные роторы) рекомендуется использовать в следующих случаях: 1. Когда проводятся процедуры с высоким потенциалом обра­ зования инфекционных аэрозолей. Это центрифугирование, измельчение, получение смесей, энергичное встряхивание или смешивание, ультразвуковое разрушение, а т а к ж е от­ крытие контейнеров с заразным материалом, в которых внутреннее давление выше атмосферного. 40

Б о к с ы для биологической безопасности и д р у г о е и з о л и р у ю щ е е о б о р у д о в а н и е Рис. 2. Боксы для биологической з а щ и т ы .

( а ) Бокс для биологической з а щ и т ы класса I .

(6) Бокс для биологической з а щ и т ы класса I I .

(в) Проверка в ы т я ж к и в боксе путем определения движения полоски из папиросной бума­ ги.

41

Техника биологической безопасности для лабораторий, работающих с В И Ч

2. Когда применяются высокие концентрации или большие объемы инфекционных агентов. Если эти материалы под­ вергаются центрифугированию в открытом (без изоляции) лабораторном помещении, то необходимо использовать гер­ метичные головки или безопасные центрифужные стаканы, причем эти головки и стаканы должны заполняться и за­ гружаться только в ручных боксах для биологической за­ щиты. Ручной бокс для биологической безопасности класса I — это рабочая камера с открытой передней поверхностью, обес­ печенная устройством для вытяжной вентиляции с целью за­ щиты персонала и окружающего пространства лаборатории за счет обеспечения оттока внутреннего воздуха от оператора. Вытягиваемый воздух фильтруется перед выходом из бокса через высокоэффективный воздушный фильтр для мелких ча­ стиц ( Н Е Р А ) . Ручной бокс для биологической защиты класса I рекомендуется для использования во всех лабораториях, где нет специально обученного персонала и оборудования, требу­ ющегося для рутинного испытания воздушных фильтров, про­ верки герметичности боксов и определения балансированного тока воздуха. Данный бокс не предназначен для защиты от материалов, связанных с воздушно-капельной контаминацией (рис. 2 , а ) . Бокс для биологической безопасности класса II — это ра­ бочая камера с не полностью открытой перед ней стенкой, обеспечивающая защиту персонала и окружающего лаборатор­ ного пространства з а счет "барьерного тока воздуха" через рабочее отверстие (рис. 2,6). Бокс предупреждает также кон­ таминацию разных веществ (в том числе обрабатываемых в ходе эксперимента) з а счет оттока профильтрованного через Н Е Р А воздуха в одном направлении — вниз ("ламинарный поток"). Боксы для биологической защиты класса II нуждаются в рутинной проверке и обслуживании опытными техниками для поддержания барьерного тока воздуха, а т а к ж е для обес­ печения целостности камер вентиляции под давлением и эф­ фективности работы воздушных фильтров. Этими боксами нельзя пользоваться, если не обеспечено их рутинное квали­ фицированное обслуживание. Существуют несколько тестов для проверки изолирующей способности боксов для биологи-

ВоЕсы ДЛЯ б и о л о г и ч е с к о й б е з о п а с н о е ™ и д р у г о е и з о л и р у ю щ е е о б о р у д о в а н и е

ческой безопасности класса I I ; в этих случаях недостаточно только теста для определения скорости тока воздуха в лабо­ ратории. Ориентировочный тест, позволяющий определить, з а щ и щ а ­ ет ли ручной бокс класса I лабораторного работника, основан на использовании химического "дыма". Ватный тампон опу­ скают в четыреххлористый титан, который при соединении с воздухом образует белый "дым". Этот тампон передвигают по периметру рабочего отверстия. Бели дым затягивается внутрь, бокс работает правильно. Если дым тянется или смещается наружу, это означает, что работник не защищен. Палочки или тюбики для получения химического дыма есть в продаже. Следует иметь в виду, что четыреххлористый титан — ток­ сичное вещество и с ним надо обращаться осторожно. Альтер­ нативный метод проверки заключается в следующем: подве­ шивают полоску из резины или папиросной бумаги у рабочего отверстия (рис. 2,в) и смотрят, всасывается ли она внутрь бокса. Необходимо внимательно относиться к р а з м е щ е н и ю бокса для биологической з а щ и т ы внутри лаборатории. В о з д у ш н ы е потоки, проходящие через рабочую поверхность бокса, могут м е ш а т ь " з а щ и т н о м у " току в о з д у х а , и поэтому микроорга­ низмы могут не попадать в бокс. В с в я з и с этим боксы нельзя у с т а н а в л и в а т ь около дверей или окон. Они должны н а х о ­ диться на расстоянии от м а р ш р у т о в передвижения людей в к о м н а т е . Боксы не следует т а к ж е р а з м е щ а т ь вблизи входных или в ы т я ж н ы х решеток механических вентиляционных си­ стем. Если бокс для биологической безопасности в лаборатории отсутствует и в то же время необходимо защитить сотрудников от аэрозолей, можно оборудовать рабочий отсек с вентиляцией под отрицательным давлением. Сотрудники, работающие в этом отсеке, должны наряду с обычной защитной одеждой носить маску с фильтром Н Е Р А и защитные очки. Центрифуги и другое оборудование, продуцирующее аэрозоли, могут по­ мещаться в ящиках с отрицательной вентиляцией или в других изолированных пространствах с целью обеспечения необходи­ мой защиты. Дополнительная информация, относящаяся к рабочие! стан43

^

Техника биологаческой безопасности для лабораторий, р а б о т а ю п и а с В И Ч

дартам и испытанию боксов для биологаческой защиты, со­ держится в ОшйеИпев }ог Ыо1о^са1 8а/е1у саЫпе1$ (неопубли­ кованный документ ВОЗ СВ8/8ММ /81.21). Эту информацию можно т а к ж е запросить по адресу: О т я ю п о1 СошшишсаЫе В18еа8е8, А^огИ Н е а И Ь О г е а т г а Н о п , 1211 О е п е у а 27, 8т12ег1апд.

Ответственный

Перевод с английского за редактирование

Б.А. Е.К.

Годованного Кудрявцева

Заказ

Типофафия № 9