WHO Scientific activities

/Scienti/ic activities / ~WHO-OMS Activites scientifiques Bulletin ofthe WorldHealth Orga,tization, 61(2): 251-254(1983) Live oral typhoid vaccine Although information on typhoid fever cases has been collected in many countries, the data are in- complete and difficult to interpret because of the lack of universally accepted reporting criteria. However, while a comparison of the situation in different coun- tries is not possible, some general trends are apparent. It is clear that the reported morbidity is a gross under- estimate and that the disease is usually more prevalent in less developed areas. More information is needed in order to define more clearly the epidemiological characteristics of the disease, the high-risk groups, and the vehicles of transmission. The collection of such data has greatly facilitated control in some coun- tries and is even more relevant today in anticipation of the availability of the live oral typhoid Ty2la vaccine as a new public health tool. The safety of the Ty2la strain has been tested and proved through challenge studies in the USA, a large field trial in Egypt, a smaller pilot project in Chile, and by laboratory studies which have confirmed the genetic stability of the vaccine. The current commer- cially available vaccine formulation incorporates 109 organisms in a gelatin capsule and is given along with 0.8 g of NaHCO3 to neutralize gastric acidity. Another, more practical, formulation -an enteric coated capsule which can be given without bicar- bonate- is currently being evaluated. A large-scale field trial is being conducted in Chile, which should provide information on (a) whether an enteric coated capsule represents a successful formulation for delivering vaccine organisms in a viable state to the small intestine, and (b) whether one or two doses of this formulation are efficacious in an endemic area. Research is still needed on various aspects of typhoid itself and the use of the vaccine. At a meeting convened in Geneva in June 1982 by the WHO Pro- gramme on Diarrhoeal Diseases Control, a subcom- mittee of the Scientific Working Group on Bacterial Enteric Infections outlined the specific areas in which more work was needed. Studies are needed to delineate specific epidemio- logical features of typhoid fever, e.g., the incidence of © World Health Organization 1983 the disease in children under 5 years of age. In view of the atypical clinical features reported in young chil- dren, more research is needed to establish clear diag- nostic criteria for the disease in this age group. Simple, reliable laboratory tests are required for the rapid diagnosis of typhoid fever, particularly in the field, and more effective tools are needed for measur- ing the immune response in patients, carriers, and vaccinees. As regards the vaccine itself, studies are needed to determine the immunogenicity and the duration of protection offered, and to find ways of facilitating the passage of the Ty2la strain through the stomach, per- haps by administering the vaccine with food or drink. If epidemiological evidence indicates that immu- nization of young children should be considered, information will be needed on the safety, immuno- genicity, and efficacy of the vaccine in this group. The most appropriate schedule of administration in relation to other live oral vaccines, and the non- specific impact of other infections on the immune response to the vaccine need to be assessed. Further work is also required to assess and improve the stability and viability of the various vaccine formu- lations under different storage conditions. Since there are, as yet, no simple laboratory or clinical tests to verify a successful "take" following immunization, it was considered that any changes in the formulation of the vaccine, the spacing of doses, the number of organisms per dose, or the number of doses administered should be evaluated by controlled field trials. The subcommittee outlined a set of guide- lines to be taken into account when planning and carrying out such trials. Rotavirus diarrhoea Rotavirus was first detected in human subjects in Melbourne, Australia, in 1973, by thin-section elec- tron microscopic examination of duodenal biopsies obtained from children with acute diarrhoea, and shortly after in Australia, Canada, the United King- dom, and the USA by electron microscopic examin- ation of diarrhoeal stool specimens. The virus has - - w 4278 -251 252 WHO SCIENTIFIC ACTIVITIES since emerged as the single most important cause of diarrhoea in infants and young children admitted to hospital for the treatment of gastroenteritis. The present state of knowledge in the field of rotavirus diarrhoea was reviewed in depth at the second meet- ing of the Scientific Working Group on Viral Diar- rhoeas, and priority areas for future research were outlined.a Although there have been numerous studies in both tropical and temperate countries on the monthly and annual frequency of rotavirus infection in children admitted to hospital, there is still a need for long-term community-based studies of the incidence and preva- lence of the infection. These should include longi- tudinal surveys of rotavirus antibody titres in sera from selected cohorts of children in developing coun- tries. The incidence and clinical severity of concurrent infections with rotavirus and other enteric pathogens also requires further study. More research is needed on the factors that influ- ence the survival of rotaviruses in the environment, both in the community at large and within closed com- munities such as hospital wards, day-care centres, and nursing homes. The relative importance of water, food, air, and fomites as vehicles in the spread of rotavirus infection needs to be determined. The exact antigenic structure of rotavirus is still unclear and there is at present some disagreement among investigators as to which polypeptides are incorporated in the virion and which are non-struc- tural. The precise disposition of the polypeptides in the virion is therefore an important matter, and much research is already in progress in this area; work on monoclonal antibodies and further biochemical studies will probably help considerably to clarify the position. The availability of new techniques for the direct iso- lation of rotavirus from clinical material has stimulated research relating to the antigenic structure, classification, and diagnosis of rotavirus. Specific areas requiring further attention include: - development of methods for rapid identifi- cation of rotavirus subgroups and serotypes; - adoption of an agreed nomenclature or number- ing system for the classification of rotavirus sub- groups and serotypes; - adoption of an agreed system, possibly similar to that used for influenza virus and poliovirus, for the registration of tissue-culture adapted rotavirus iso- lates in each country or region; - further development of monoclonal antibodies for the diagnosis of rotavirus. a Report of the Second Meeting of the Scientific Working Group on Viral Diarrhoeas: Microbiology, epidemiology, immunology, and vaccine development. WHO unpublished document, WHO/ CDD/VID/82.3, 1982. Development of rotavirus vaccine The development of a rotavirus vaccine deserves high priority. In the development of such a vaccine, it would be helpful to have an understanding of the mechanisms by which immunity to rotaviral illness is achieved. To date, animal studies in calves, piglets, and lambs have demonstrated the importance of intestinal rotaviral antibody in preventing or attenu- ating illness. In specially pertinent studies in lambs, rotavirus antibody administered by the alimentary route was effective in inducing resistance to rotavirus challenge by the same route, whereas circulating antibody alone was not characteristically protective. There have been very few studies, however, of the mechanisms of immunity to rotavirus illness in humans. A major obstacle to vaccine development has been the inability to propagate human rotaviruses effi- ciently in cell cultures, as a result of which it has not been possible to produce enough human rotavirus antigen for vaccine development studies. However, important advances have been made in this area, and several human rotavirus strains have now been successfully cultivated in cynomolgus monkey kidney cell cultures. It may now be possible to develop attenuated mutants by various methods such as cell culture passage, cold adaptation, chemical muta- genesis, or reassortment. Another strategy being pursued is the utilization of a calf rotavirus to immunize human subjects, with the aim of evoking protective antibodies without causing illness. The promise of this type of approach has been demonstrated (a) in calves, inoculated in utero with bovine rotavirus, which were significantly protected against challenge with human rotavirus on the day of, or one day after birth, and (b) in piglets, infected with bovine rotavirus and later challenged with human rotavirus, which shed virus for significantly fewer days than did control animals. A number of research groups are seeking to apply recombinant DNA methods to the characterization of rotavirus genome segments. This approach is seen as a promising means both of obtaining basic information on the nature of rotavirus genes and of producing rotavirus proteins that could be of value in vaccine development. Another approach to the prevention of rotavirus ill- ness involves the administration of high-titre rota- virus antibody by the alimentary route. Various ani- mal studies have demonstrated the feasibility of this passive immunization approach for a defined period. In one study in human subjects, 4-9-day-old breast- fed infants had significantly fewer rotavirus infec- tions than those who were not breast-fed. In another study, antibodies and/or trypsin inhibitors present in human milk were found to be associated with protec- WHO SCIENTIFIC ACTIVITIES 253 tion of neonates against rotavirus infection in the first 5 days of life. These findings could be important, but they require confirmation. With the passive immunization approach, it might be feasible to immunize pregnant mothers with in- active or live rotavirus vaccine in an attempt to stimu- late high levels of antibody in breast milk. It might also be feasible, in selected circumstances, to produce high-titre homologous antibody (or heterologous antibody, if found to be safe), or to prepare suitably treated human immune serum globulin, and add such antibody to the infant's diet for a defined period. Influenza viruses: sequencing of haemag- glutinin genes The WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Influenza in London, England, routinely analyses the antigenic properties of viruses submitted by national influenza centres, using reference convalescent ferret antisera, hyperimmune rabbit antisera, and mouse monoclonal antibodies. From time to time, additional procedures are applied to the study of the haemagglutinins and haemagglutinin genes of epidemiologically important viruses, in an attempt to obtain more information on the structural basis of antigenic differences. These procedures have included tryptic peptide mapping, RNA-RNA hybridization, and RNase-T1 oligonucleotide map- ping. The logical extension of all these methods is to determine the sequence of the haemagglutinin genes directly and this project was therefore undertaken with particular regard to the routine applicability of the procedure used. The method chosen involves the "dideoxy-sequenc- ing" procedure developed by Sanger and his col- leaguesb and utilizes 5 _-32P-labelled synthetic oligo- deoxynucleotides that are complementary in sequence to specific regions of the haemagglutinin gene as primers for reverse transcriptase. The oligodeoxy- nucleotides are synthesized using the phosphotriester solid phase procedure recently modified by Patel et al.c The following have now been synthesized: phos- phorylated, fully-blocked deoxynucleotides; fully- blocked deoxynucleotides attached to polydimethyl- acrylamide resin; and the mesitylenesulphonyl-3- nitro-1,2,4-triazole coupling agent. Oligodeoxy- nucleotides of from 10 to 12 deoxynucleotides in length have been synthesized and purified and have been used in sequence studies of the haemagglutinin b SANGER, F. ET AL. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica, 74: 5463-5467 (1977). ' PATEL, T. P. ET AL. Nucleic acids research, 10: 5605-5620 (1982). genes of 42 viruses to date, including those of the recently isolated antigenic variants A/Bangkok/ 1/79, A/Shanghai/3 1/80, and A/Belgium/2/8 1, 24 antigenic variants of the H3 subtype, selected by monoclonal antibody, the recent equine influenza variant A/Fontainebleau/79 and its predecessor A/Miami/63, and a number of mutants of fowl plague virus (Rostock strain). The availability of synthetic primers ensures that the sequences of haemagglutinins of interest, of the H3 subtype, can be determined within two weeks of RNA extraction and, as a consequence, that strain surveillance can now include, in addition to antigenic analysis, the ultimate definition of haemagglutinin variation by direct sequence determination. In addi- tion, the oligodeoxynucleotides have already proved of considerable value in research studies on the mol- ecular basis of the antigenicity, adsorption, and fusion properties of the Hong Kong (H3) haemag- glutinin. Accelerated research programme on blackfly larvicides Resistance to temephos and chlorphoxim appeared in certain species of the Simulium damnosum com- plex in the Volta Basin area in 1980-81. In December 1981, the Joint Programme Committee of the WHO Onchocerciasis Control Programme (OCP) was in- formed of the problem, and an emergency plan of action to develop replacement larvicides was approved. The intensive programme proposed included: - preparing an exhaustive review of the scientific information already published (or in preparation) on blackfly control and the aspects of the biology of these Diptera that could play a role in control; - developing an information system containing data that could be useful in selecting blackfly larvi- cides; these data have been accumulated over the last 20 years by the WHO programme for the evaluation and testing of new pesticides; - encouraging pesticide manufacturers to prepare new formulations and to supply samples of new com- pounds or of older compounds that may be useful; - speeding-up the trials of new products, through closer links with the WHO Collaborating Centres and through the establishment of a specialized research unit within OCP; - improving surveillance of insecticide resistance within the Programme. There was also provision for research on the feed- ing behaviour of larvae of the S. damnosum complex, physicochemical research on larvicide formulations, 254 WHO SCIENTIFIC ACTIVITIES determination of the optimum characteristics of larvi- cides acting against the species in the S. damnosum complex, large-scale trials of new formulations, and continued studies on the mechanisms of resistance. A review has now been completed of the scientific literature on the biology of blackfly larvae, on insecti- cide trials, and on large-scale operations so far under- taken against the blackfly. The aim was to summarize available knowledge and to draw from it useful lessons for the Programme. The resulting document contains a bibliography that is a source of full and up- to-date information and has brought to light the following points: (a) Current knowledge indicates that continued studies of larval feeding will not lead to the desired rapid improvement in larvicide technology. (b) Research on larvicides should be conducted on the relevant species of the vector complex and the associated fauna. This is because of the difficulty of extrapolating from the results obtained with other species, under different conditions, to those found in the Programme area. (c) Since the monitoring of the aquatic environ- ment, as practised under the Programme, has proved fully satisfactory, it ought to be extended to the new larvicides as soon as they are selected for operational use. Approximately 30 companies manufacturing chemical and biological agents for vector control have been visited and, although most of them had pre- viously given up trials on domestic flies and mos- quitos, several now intend to resume tests on mos- quitos. A number of new products were suggested, mainly pyrethroids and insect growth regulators. An Insecticide Research Unit was set up at the beginning of 1982 and now has four research officers. It is concerned with the trial and selection of the larvi- cides made available, and research on cross-resistance with temephos and chlorphoxim. The Programme now has four teams permanently engaged in monitor- ing resistance in the field. A large number of new compounds have now undergone small- and large-scale testing in the labora- tory and the field. Several compounds -including azamethifos and probably methiocarb -and Bacillus thuringiensis H-14 have been found to act as blackfly larvicides. Additional research is needed to develop operational formulations, and contacts between industry and the Programme should be maintained. Identification of pathogens of arthropods Vectors of human disease are themselves suscep- tible to various parasitic, viral, bacterial, and fungal infections, which can cause a reduction in the number of larvae that survive to adulthood. The precise iden- tification of the various factors responsible for reduc- tions in population size would provide a useful basis for planning elimination and control measures against these vectors. Diseases are principally of two types, chronic and acute. Chronic infections persist and recycle in the host population, usually killing small numbers of infected vectors near the end of their development. Substantial numbers of susceptible hosts escape the disease or have benign or inapparent infection, thus transmitting the infection to the next generation and maintaining a balanced population. Acute infections are generally introduced from other biotopes, or are cycled from one host to another, and progress very rapidly. These pathogens attack and kill all suscep- tible hosts. They usually have some shelter for sur- vival such as soil, infected cadavers, or other hosts where the infection is at a chronic level. Identification of the organisms that cause acute disease is an impor- tant aspect of vector control activities. The World Health Organization has produced an introductory guide to the field detection of pathogens and parasites of vector arthropods.d It is intended to facilitate the recognition of diseases of vectors in their natural habitats, and proposes methods that have been found useful in previous studies of this nature. The guide covers the pathogens and parasites that cause apparent disease symptoms, such as a decrease in activity or fertility, the formation of visible cysts, or discolouration of the host. Reference is made to organisms that may be mistaken for true pathogens, but epibionts and gut symbionts are not considered. d WEISER, J. Guide to field determination of major groups of pathogens affecting arthropod vectors of human diseases. WHO unpublished document, WHO/VBC/82.860, 1982. Bulletin de l'Organisation mondiale de la Santt, 61(2): 255-259 (1983) Activites scientifiques OMS Vaccin antityphoidique buccal vivant Bien que des renseignements sur les cas de fievre typhoide aient ete reunis dans de nombreux pays, les donnees sont incompletes et difficiles a interpreter par suite du manque de criteres de notification uni- versellement admis. Toutefois, s'il est impossible de comparer la situation dans les divers pays, certaines tendances generales sont manifestes. I1 est clair que les notifications de la morbidite sous-estiment grossierement l'ampleur du probleme et que la maladie a en general une prevalence plus elevee dans les regions les moins developees. I1 est necessaire de recueillir davantage d'informations pour definir plus clairement les caracteristiques epidemiologiques de la maladie, les groupes a haut risque et les vehicules de transmission. Le rassemblement de donnees de ce genre a grandement facilite la lutte contre cette mala- die dans certains pays et son interet est encore plus evident aujourd'hui qu'on a 1'espoir de disposer d'un nouvel instrument en sante publique, le vaccin anti- typhoidique buccal vivant Ty2la. L'innocuite de la souche Ty2la a ete eprouvee et confirmee par des experiences d'administration aux Etats-Unis d'Amerique, un vaste essai sur le terrain en Egypte et un projet pilote plus restreint au Chili, ainsi que par des etudes en laboratoire qui ont confirme la stabilite genetique du vaccin. La prepara- tion vaccinale actuellement disponible dans le com- merce est presentee sous forme de capsules de gelatine contenant 109 germes et elle est administree en meme temps que 0,8 g de NaHCO3 (bicarbonate) destine 'a neutraliser l'acidite gastrique. Une autre preparation, d'un emploi plus pratique -une capsule gastro- resistante qui peut etre prise sans bicarbonate- est en cours d'evaluation. Un essai pratique de grande envergure, effectue au Chili, doit fournir des ren- seignements sur deux points: a) l'interet de la capsule gastro-resistante pour l'administration de micro- organismes vaccinaux qui arrivent 'a 1'tat viable au niveau du grele, et b) 1'efficacite d'une ou de deux doses de cette formulation dans une zone d'endemie. Des recherches sont encore necessaires sur divers aspects de la typhoide elle-meme ainsi que sur l'emploi du vaccin. Lors d'une reunion organisee A Geneve en juin 1982 par le Programme OMS de lutte contre les maladies diarrheiques, un sous-comite du Groupe de travail scientifique sur les infections in- testinales bacteriennes a determine les domaines precis ofi de plus amp!es recherches devront etre entreprises a l'avenir. Des etudes sont necessaires pour cerner les aspects epidemiologiques propres a la typhoide, par exemple l'incidence de la maladie chez les enfants de moins de 5 ans. Du fait des caracteres cliniques atypiques signales chez le jeune enfant, il faut approfondir les recherches pour etablir des criteres diagnostiques precis pour la fievre typhoide dans ce groupe d'age. Des epreuves de laboratoire simples et fiables sont necessaires pour le diagnostic rapide de la typhoide, particulierement dans les conditions de terrain, ainsi que des techniques plus efficaces pour mesurer la reponse immunitaire des malades, des porteurs et des sujets vaccines. En ce qui concerne le vaccin lui-meme, il convient d'etudier l'immunogenicite et la duree de la protec- tion conferee et de decouvrir des moyens de faciliter le transit gastrique de la souche Ty2la, peut-etre par l'administration du vaccin avec des aliments solides ou liquides. Si des observations epidemiologiques indiquent que la vaccination doit etre envisagee chez le jeune enfant, des informations seront indispen- sables sur l'innocuite, l'immunogenicite et l'efficacite du vaccin dans ce groupe d'age. Il faudra clairement definir le calendrier le plus approprie pour l'adminis- tration du vaccin par rapport a celle d'autres vaccins oraux vivants et l'influence non specifique d'autres infections sur la reponse immunitaire au vaccin anti- typhoidique. Les travaux devront aussi etre pour- suivis en vue d'evaluer et d'ameliorer la stabilite et la viabilite des diverses formulations vaccinales dans differentes conditions de stockage. Puisqu'il n'existe a l'heure actuelle ni methodes de laboratoire ni examens cliniques simples permettant de verifier la «prise>> du vaccin, le sous-comite a estime que les modifications eventuelles apportees a la formulation du vaccin, a l'espacement des doses, au nombre de germes vaccinaux par dose ou au nombre de doses administrees devraient etre evaluees par des essais pratiques controles. Le sous-comite a propose un certain nombre de directives pour la planification et l'execution de ces essais. Diarrh6e a rotavirus Les rotavirus ont ete decouverts chez l'homme en 1973, a Melbourne (Australie), lors de l'examen au microscope electronique de coupes minces de biopsies duodenales provenant d'enfants atteints de diarrhee aigue. On les a retrouves peu apres en Australie, au . Organisation mondiale de la SaW 1983 -2554279 256 ACTIVITES SCIENTIFIQUES OMS Canada, aux Etats-Unis d'Amerique et au Royaume- Uni, A l'examen en microscopie electronique d'echan- tillons de selles diarrheiques. Ces virus ont depuis ete reconnus comme la plus importante des causes de diarrhee chez les nourrissons et les jeunes enfants hospitalises pour gastro-enterite. Le groupe scienti- fique de travail sur les diarrhees virales a consacre sa deuxieme reunion A une revue approfondie de l'etat actuel des connaissances sur la diarrhee A rotavirus, et il a defini les domaines prioritaires pour les re- cherches futures.a En depit des nombreuses etudes menees, tant dans les pays tropicaux que dans les pays temperes, sur la frequence mensuelle et annuelle de l'infection A rota- virus chez les enfants hospitalises, il demeure neces- saire de poursuivre des etudes de longue haleine basees sur la communaute pour determiner l'inci- dence et la prevalence de ces infections. Ces etudes devraient comprendre des enquetes longitudinales visant A determiner les titres seriques d'anticorps anti- rotavirus chez des cohortes d'enfants de pays en developpement. L'incidence et la gravite clinique des infections concomitantes A rotavirus et A autres micro-organismes enteropathogenes doivent aussi faire l'objet d'une etude plus approfondie. Des recherches supplementaires doivent etre consa- crees aux facteurs qui conditionnent la survie des rotavirus dans l'environnement, tant dans la commu- naute en general que dans des collectivites fermees telles que les services hospitaliers, les creches et les maisons de convalescence. On devra en outre deter- miner l'importance relative de l'eau, des aliments, de l'air et des contages en tant que vehicules des infec- tions A rotavirus. La structure antigenique des rotavirus n'a pas encore 'te parfaitement 6lucid6e et certains des- accords subsistent sur la repartition des polypeptides en deux categories, selon qu'ils sont incorpores au virion ou non structuraux. La disposition exacte des polypeptides dans le virion est donc une question importante et nombre de recherches sont deja en cours dans ce domaine; des travaux sur les anticorps monoclonaux et de nouvelles etudes biochimiques contribueront sans doute largement A eclaircir ce probleme. Les techniques nouvelles permettant d'isoler directement des rotavirus a partir du materiel clinique ont stimule les recherches sur la structure anti- genique, la classification et le diagnostic des rota- virus. Parmi les domaines qui doivent encore retenir l'attention des chercheurs figurent: - 1'elaboration de methodes d'identification rapide des sous-groupes et serotypes de rotavirus; a Rapport de la deuxieme reunion du groupe de travail scienti- fique sur les diarrhees virales: microbiologie, e'pide'miologie, immu- nologie et mise au point de vaccins. Document OMS non publie, WHO/CDD/VID/82.3, 1982. - l'adoption d'une nomenclature et/ou d'un sys- teme de numerotation agrees pour la classification des sous-groupes et serotypes de rotavirus; - l'adoption d'un systeme agree, qui pourrait etre semblable A celui qui est utilise dans le cas des virus grippaux et des poliovirus, pour l'enregistrement, dans chaque pays ou region, des isolements de rota- virus adaptes a la culture cellulaire; - la poursuite de la mise au point d'anticorps monoclonaux pour le diagnostic des rotavirus. Mise au point d'un vaccin contre les rotavirus La mise au point d'un vaccin contre les rotavirus doit figurer au premier rang des priorites. Pour pro- duire un tel vaccin, il serait utile de comprendre les mecanismes de protection immunitaire contre les rotavirus. Des etudes sur le veau, le porcelet et I'agneau ont dejA montre l'importance des anticorps anti-virus intestinaux dans la prevention ou l'attenua- tion de la maladie. Au cours de travaux sur l'agneau particulierement significatifs, des anticorps anti- rotavirus administres par voie digestive ont suscite une resistance A une dose d'epreuve de rotavirus administree par la meme voie, alors que les anticorps circulants seuls ne conferaient aucune protection notable. Toutefois, ces mecanismes immunitaires ont ete tres peu etudies chez l'homme. L'un des principaux obstacles A la mise au point d'un vaccin tient aux difficultes de la multiplication des rotavirus humains en culture cellulaire, de sorte qu'on ne dispose pas de la quantite d'antigenes de rotavirus humain necessaire pour les etudes. Des progres importants ont cependant ete realises en ce domaine puisqu'on a reussi maintenant a cultiver plusieurs souches de rotavirus humain sur des cellules renales de singe cynomolgus. I1 est desormais possible de mettre au point des mutants attenues par diverses methodes, telles que passage sur culture cellulaire, adaptation au froid, mutagenese chimique, ou reas- sortiment genetique. Une autre voie de recherche consiste a vacciner l'homme avec un rotavirus de veau pour provoquer l'apparition d'anticorps sans qu'il y ait maladie. Ce type d'approche s'est revel prometteur a) chez des veaux auxquels on a inocule in utero des rotavirus bovins, leur conferant ainsi une protection notable contre une dose d'epreuve de rotavirus humain administree le jour ou le lendemain de leur naissance, et b) chez des porcelets auxquels on a inocule un rota- virus bovin et obtenu ainsi une reduction significative (par rapport aux animaux temoins) de la duree d'excretion du virus apres administration d'une dose d'epreuve de rotavirus humain. Une autre approche de la prevention des maladies A rotavirus consiste A administrer per os des titres eleves d'anticorps anti-rotavirus. Diverses etudes sur des animaux ont montre que cette forme d'immunisation ACTIVITES SCIENTIFIQUES OMS 257 passive etait efficace pendant une periode determi- nee. Au cours d'une etude sur l'homme, les nour- rissons de quatre A neuf jours allaites au sein ont contracte sensiblement moins d'infections A rotavirus que les nourrissons alimentes au biberon. Une autre etude a montr6 que des anticorps et/ou des inhibi- teurs de la trypsine presents dans le lait humain etaient lies A la protection des nouveau-ne's contre les infections A rotavirus pendant les cinq premiers jours de l'existence. Ces observations, qui pourraient etre importantes, demandent A etre confirmees. Dans cette optique de l'immunisation passive, il serait peut- etre possible d'administrer aux femmes enceintes un vaccin A rotavirus, inactives ou vivants, afin de stimuler l'apparition de titres eleves d'anticorps dans le lait maternel, qui passeraient ensuite chez le nour- risson. Dans certains cas, on pourrait aussi produire, A titres eleves, des anticorps homologues (ou des anti- corps heterologues si ces derniers se revelent sans danger) ou encore preparer des immunoglobulines seriques humaines convenablement traitees et ajouter ces anticorps A l'alimentation du nourrisson pendant une certaine duree. Virus de la grippe: d6termination de la s6quence des nucl6otides des genes de I'Mhmagglutinine Le centre collaborateur OMS de reference et de recherche pour la grippe, A Londres, effectue les ana- lyses de routine sur les proprietes antigeniques des virus qui lui sont soumis par les centres nationaux de la grippe, en utilisant les antiserums de reference provenant de furets convalescents, des antiserums hyperimmuns de lapin et des anticorps monoclonaux de souris. De temps A autre, des techniques suppl&- mentaires sont appliquees A l'etude des hemaggluti- nines et des genes de l'hemagglutinine des virus importants sur le plan epidemiologique, dans le but d'obtenir davantage d'informations sur les bases structurales des differences antigeniques. Ces tech- niques comprennent l'etablissement de la carte des peptides tryptiques, l'hybridation ARN-ARN, et l'etablissement de la carte des oligonucleotides ob- tenus par action de la RNase-T1. La suite logique de toutes ces methodes est de determiner directement la sequence des genes de l'hemagglutinine; ce projet a donc ete entrepris en tenant compte particulierement de la possibilite d'appliquer dans la routine la methode utilisee. La m6thode choisie est la technique de odeftermi- nation des sequences par didesoxynucleotide>>, mise au point par Sanger et al.b et qui utilise, comme b SANGER, F. ET AL. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica, 74: 5463-5467 (1971). amorces pour la transcriptase inverse, des oligo- desoxynucleotides synthetiques 5'_32P qui ont une sequence complementaire de celle des regions speci- fiques du gene de l'hemagglutinine. Les oligodesoxy- nucleotides sont synthetises par la methode au phos- photriester en phase solide, recemment modifiee par Patel et al.c Les reactifs suivants ont ete synthetises: des desoxynucleotides phosphoryles completement blo- ques, des d6soxynucleotides completement bloques fixes sur une resine polydimethylacrylamide et un agent de couplage, le mesitylenesulfonyl nitro-3 triazole-1 ,2,4. Des oligodesoxynucleotides d'une longeur de 10 A 12 bases ont ete synthetises puis purifies et ont ete utilises A ce jour dans des etudes sur la sequence des genes de l'hemagglutinine de 42 virus, comprenant notamment les variants antigeniques recemment isoles A/Bangkok/1/79, A/Shanghai/31/80 et A/Belgium/2/81, 24 variants antigeniques du sous- type H3 selectionnes a I'aide d'anticorps monoclo- naux, le recent variant de la grippe equine A/Fon- tainebleau/79 et son predecesseur A/Miami/63 et un certain nombre de mutants du virus de la peste aviaire (souche Rostock). La disponibilite de stocks d'amorces synthetiques permet de determiner les sequences d'hemaggluti- nines interessantes, du sous-type H3, dans les deux semaines qui suivent 1'extraction de I'ARN et, en consequence, d'inclure dans la surveillance des souches, en plus des analyses antigeniques, la defini- tion finale des variations de l'hMmagglutinine par la determination directe des sequences. En outre, les oligodesoxynucleotides se sont deja reveles extreme- ment utiles dans les recherches sur la base moleculaire de l'antigenicite, ainsi que sur les proprietes d'ad- sorption et de fusion de l'hemagglutinine du virus de Hong Kong (H3). Programme acc6l6r6 de recherche sur les larvicides utilis6s contre les simulies Une resistance au temephos et a la chlorphoxime est apparue en 1980-1981 chez certaines especes du complexe Similum damnosum dans la region du bassin de la Volta. En decembre 1981, le Comite conjoint du Programme OMS de lutte contre l'onchocercose (OCP) a ete informe du probleme et un plan d'urgence a ete approuve en vue de la mise au point de larvicides de remplacement. Le plan d'urgence proposait: - de proceder A une mise au point, en rassemblant les informations scientifiques deja publiees ou en c PATEL, T. P. ET AL. Nucleic acids research, 10: 5605-5620 (1982). ACTIVIT-S SCIENTIFIQUES OMS cours d'elaboration sur la lutte contre les simulies et sur les aspects de la biologie de ces dipteres susceptibles d'etre mis a profit dans les activites de lutte; - de mettre sur pied un systeme d'information qui fournirait des donnees utiles pour la s6lection de larvicides contre les simulies. Ces donnees ont e reunies au cours des 20 dernieres annees dans le cadre du programme OMS pour l'evaluation et l'essai de nouveaux pesticides; - d'encourager les fabricants de pesticides A preparer de nouvelles formulations et A fournir des echantillons de nouveaux ou d'anciens composes qui pourraient se reveler utiles; - d'accelerer les essais de nouveaux produits en resserrant les liens avec les centres collaborateurs OMS et en etablissant une unite specialisee de recherche dans le cadre du Programme OCP; - d'ameliorer la surveillance de la resistance aux insecticides dans le cadre du Programme. Le plan prevoyait aussi des recherches sur les habitudes trophiques des larves du complexe S. damnosum, des recherches physicochimiques sur les formulations de larvicides, la determination des caracteristiques optimales des larvicides actifs contre les especes du complexe S. damnosum, des essais de grande envergure des nouvelles formulations et la poursuite des etudes sur les mecanismes de la resistance. Le d6pouillement de la litterature scientifique sur la biologie des larves de simulies, les essais d'insecticides et les campagnes de grande envergure dejA entreprises contre les simulies, est acheve. Son objectif etait de recapituler les connaissances acquises et d'en tirer des enseignements pour le Programme. Le document etabli contient une bibliographie complete et A jour et met en relief les points suivants: a) Les connaissances acquises indiquent que la poursuite des etudes sur les habitudes trophiques des larves n'amenera pas la rapide amelioration desir6e dans la technologie des larvicides. b) Les recherches sur les larvicides devraient etre effectuees sur les especes appropriees du complexe de vecteurs et la faune associee, car il est difficile d'extrapoler les resultats obtenus avec d'autres especes, et dans des conditions qui ne sont pas les memes, aux especes existant dans la zone couverte par le Programme. c) Etant donne que la surveillance de l'environne- ment aquatique, telle qu'elle est exercee dans le cadre du Programme, a donne pleine satisfaction, il y aurait lieu de l'etendre aux nouveaux larvicides d&s qu'ils sont retenus en vue de leur emploi operationnel. Une trentaine de societes fabriquant des agents chimiques et biologiques pour la lutte antivectorielle ont ete visitees; si la plupart d'entre elles ont aban- donne les essais sur les mouches domestiques et les moustiques, plusieurs ont exprime leur intention de reprendre les essais sur les moustiques. Un certain nombre de nouveaux produits ont ete suggeres, sur- tout des pyrethroides et des regulateurs de la crois- sance des insectes. Une unite de recherche sur les insecticides a e constituee au debut de 1982 et comprend maintenant quatre chercheurs. Elle s'occupe de l'essai et de la selection des larvicides devenus disponibles ainsi que des recherches sur la resistance croisee au temephos et a la chlorphoxime. Le Programme comprend desor- mais quatre equipes qui travaillent en permanence A la surveillance de la resistance sur le terrain. Un grand nombre de nouveaux composes ont ete soumis a des essais, restreints ou de grande envergure, en laboratoire et sur le terrain. Plusieurs se sont reveles efficaces contre les larves des simulies, y compris l'azamethifos, le Bacillus thuringiensis H-14 et probablement le methiocarbe. De nouvelles re- cherches sont necessaires pour mettre au point des formulations operationnelles, et il y a lieu de main- tenir des contacts entre les milieux industriels et le Programme. Identification des agents pathogenes pour les arthropodes Les vecteurs des maladies humaines sont eux- memes sensibles a diverses infections -transmises par des parasites, des virus, des bacteries ou des champignons -qui peuvent provoquer une reduction du nombre de larves arrivant au stade adulte. L'identification precise des divers facteurs respon- sables de la rarefaction des populations de vecteurs fournirait une base utile pour la planification des mesures visant a endiguer ou eliminer ces especes. Les maladies sont principalement de deux types, chroniques et aigues. Les infections chroniques persistent et se propagent dans la population hote, tuant habituellement un nombre restreint de vecteurs infectes proches de leur dernier stade de developpe- ment. Un grand nombre d'h6tes sensibles echappent A l'infection ou sont porteurs d'une infection benigne ou inapparente et la transmettent A la generation suivante, d'ou le maintien d'une population stable. Les infections aigues sont generalement introduites A partir d'autres biotopes ou se propagent d'un h6te a l'autre et se developpent tres rapidement. Les agents pathogenes correspondants attaquent et tuent tous les hotes sensibles. Ils ont generalement un abri pour survivre, tel que le sol, les cadavres infectes ou d'autres hotes chez qui l'infection est chronique. L'identification des organismes qui provoquent une 258 ACTIVITES SCIENTIFIQUES OMS 259 atteinte aigue est un aspect important des activites de lutte antivectorielle. L'Organisation mondiale de la Sante a redige un guide qui constitue une introduction a la detection sur le terrain des pathogenes et parasites des arthropodes dvecteurs. Son objectif est de faciliter l'identification des maladies des vecteurs dans leurs biotopes naturels et de proposer des methodes dont I'utilite a e etablie lors de pr&cedentes etudes de ce genre. Le guide couvre les agents pathogenes et les parasites qui provoquent des symptomes morbides apparents, tels qu'une baisse d'activite ou de fecondite, la formation de kystes visibles ou l'alteration de la couleur de 1'hote. I1 mentionne les organismes qui peuvent etre pris a tort pour de vrais pathogenes, mais ne mentionne pas les epibiotes et les symbiotes intestinaux. d WEISER, J. Guide to field determination of major groups of pathogens affecting arthropod vectors ofhuman diseases. Document OMS non pubfie, WHO/VBC/82.860, 1982.